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EGCG通过Notch信号通路抑制早期炎症的研究

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
中英文缩写对照表第9-15页
第一章 绪论第15-33页
    1.1 炎症第15-20页
        1.1.1 炎症的概述第15-18页
        1.1.2 炎症的危害第18-20页
    1.2 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)第20-23页
        1.2.1 茶叶的历史和功效第20-21页
        1.2.2 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)第21-22页
        1.2.3 EGCG的受体研究背景第22-23页
    1.3 炎症的相关信号第23-29页
        1.3.1 NF-κB信号通路第23-24页
        1.3.2 MAPK信号通路第24-25页
        1.3.3 Notch信号通路第25-29页
    1.4 研究的背景及意义第29-33页
第二章 EGCG调节早期炎症反应第33-49页
    2.1 实验材料与仪器第33-35页
        2.1.1 实验材料及试剂第33-34页
        2.1.2 实验仪器第34-35页
        2.1.3 溶液配制第35页
    2.2 实验方法第35-42页
        2.2.1 细胞的冻存第35-36页
        2.2.2 细胞的复苏第36页
        2.2.3 细胞的换液与传代第36页
        2.2.4 THP-1 巨噬细胞的制备第36-37页
        2.2.5 Elisa操作步骤第37-38页
        2.2.6 蛋白芯片操作步骤第38-40页
        2.2.7 RNA提取第40页
        2.2.8 反转录第40-41页
        2.2.9 Real-Time PCR第41-42页
    2.3 实验结果与讨论第42-47页
        2.3.1 THP-1 来源的巨噬细胞分化第42-43页
        2.3.2 EGCG对LPS诱导的TNF alpha和IL-1 beta分泌的影响第43-44页
        2.3.3 EGCG对LPS激发的早期炎症的效应第44-46页
        2.3.4 EGCG对LPS诱导的早期炎症因子mRNA的影响第46-47页
    2.4 实验小结第47-49页
第三章 EGCG调节早期炎症并非通过经典的炎症通路第49-59页
    3.1 实验材料与仪器第49-52页
        3.1.1 实验材料及试剂第49-50页
        3.1.2 实验仪器第50页
        3.1.3 溶液配制第50-52页
    3.2 实验方法第52-55页
        3.2.1 巨噬细胞全蛋白提取第52-53页
        3.2.2 BCA法测定蛋白浓度第53页
        3.2.3 蛋白免疫印迹(Western Blot)第53-55页
    3.3 实验结果与讨论第55-56页
        3.3.1 EGCG对经典炎症信号通路NF-kB的作用第55-56页
        3.3.2 EGCG对经典炎症信号通路MAPK的作用第56页
    3.4 实验小结第56-59页
第四章 EGCG调节Notch信号通路第59-73页
    4.1 实验材料与仪器第59-60页
        4.1.1 实验材料及试剂第59-60页
        4.1.2 实验仪器第60页
    4.2 实验方法第60-61页
        4.2.1 Western Blot及IP(免疫沉淀)第60页
        4.2.2 MLuC5抗体封闭 67LR第60-61页
    4.3 实验结果与讨论第61-71页
        4.3.1 EGCG对Notch信号通路的作用第61-62页
        4.3.2 EGCG对Notch的效应存在浓度依赖性第62-63页
        4.3.3 EGCG对Notch信号通路的抑制效应具有瞬时性第63-64页
        4.3.4 EGCG通过泛素化降解Notch蛋白第64-65页
        4.3.5 EGCG抑制LPS诱导的早期炎症不依赖于 67LR第65-68页
        4.3.6 EGCG抑制早期炎症因子mRNA表达不依赖 67LR第68-69页
        4.3.7 EGCG抑制Notch蛋白的表达不依赖于 67LR第69页
        4.3.8 EGCG抑制Notch靶基因的转录第69-71页
    4.4 实验小结第71-73页
第五章 EGCG通过Notch信号通路抑制早期炎症第73-81页
    5.1 实验材料与仪器第73-74页
        5.1.1 实验材料及试剂第73页
        5.1.2 实验仪器第73-74页
    5.2 实验方法第74-75页
        5.2.1 THP-1 Notch1/2 RNAi第74页
        5.2.2 THP-1 Notch1/2 RNAi巨噬细胞的制备第74页
        5.2.3 THP-1 转染NICD-GFP及筛选第74-75页
    5.3 实验结果与讨论第75-79页
        5.3.1 THP-1 Notch1/Notch2 RNAi干扰成功第75页
        5.3.2 EGCG通过Notch信号通路抑制巨噬细胞炎症因子分泌第75-78页
        5.3.3 过表达NICD-GFP不能修复EGCG抑制LPS诱导的早期炎症645.4 实验小结第78-79页
    5.4 实验小结第79-81页
第六章 EGCG通过Notch抑制炎症适用于健康巨噬细胞第81-87页
    6.1 实验材料与仪器第81-82页
        6.1.1 实验试剂与材料第81-82页
        6.1.2 实验仪器第82页
        6.1.3 溶液配制第82页
    6.2 实验方法第82-83页
        6.2.1 PBMC细胞分离方法第82-83页
        6.2.2 PBMC来源的巨噬细胞制备第83页
    6.3 实验结果与讨论第83-85页
        6.3.1 EGCG对PBMC巨噬细胞TNF alpha分泌影响第83-84页
        6.3.2 EGCG能够抑制Notch蛋白及其靶基因的表达第84-85页
    6.4 实验小结第85-87页
讨论第87-91页
结论第91-93页
参考文献第93-101页
附录第101-110页
作者简介第110-111页
致谢第111页

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