| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第9-11页 |
| 1.1 角质化生长因子简介 | 第9-10页 |
| 1.2 KGF-1对于放化疗的防护作用 | 第10页 |
| 1.3 KGF-1在实际应用中遇到的问题 | 第10-11页 |
| 第2章 材料与方法 | 第11-32页 |
| 2.1 仪器与设备 | 第11-12页 |
| 2.2 质粒、菌株与细胞 | 第12页 |
| 2.3 试剂 | 第12-13页 |
| 2.4 基因模板与引物 | 第13-14页 |
| 2.5 常用溶液的配置 | 第14-16页 |
| 2.6 实验方法 | 第16-32页 |
| 2.6.1 rhKGF-1基因的合成 | 第16页 |
| 2.6.2 目的基因的扩增 | 第16-19页 |
| 2.6.3 测序载体的构建 | 第19-21页 |
| 2.6.4 重组表达质粒的构建 | 第21-24页 |
| 2.6.5 重组蛋白的诱导表达及重组表达质粒的筛选 | 第24-26页 |
| 2.6.6 重组蛋白诱导条件的优化 | 第26-27页 |
| 2.6.7 重组蛋白的纯化 | 第27-29页 |
| 2.6.8 rhKGF-1蛋白的活性检测 | 第29-32页 |
| 第3章 结果 | 第32-41页 |
| 3.1 密码子优化后的His-sumo-rhKGF-1序列与原序列比较 | 第32-34页 |
| 3.2 重组测序质粒PCR扩增产物的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 重组表达质粒的鉴定 | 第35页 |
| 3.4 筛选阳性表达载体与目的片段组合 | 第35-36页 |
| 3.5 诱导时间、诱导温度及诱导剂用量对重组蛋白表达的影响 | 第36-38页 |
| 3.6 重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 3.7 HaCat模型检测rhKGF-1的生物学活性 | 第39-41页 |
| 第4章 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 重组人KGF-1蛋白的研究意义 | 第41页 |
| 4.2 构建6His-SUMO-KGF1融合蛋白基因 | 第41-42页 |
| 4.3 对SDS-PAGE电泳条带的分析 | 第42页 |
| 4.4 优化诱导条件及密码子优化 | 第42页 |
| 4.5 rhKGF-1蛋白的活性测定 | 第42-44页 |
| 第5章 结论 | 第44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
