| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 HDP简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 HDP的定义与分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 HDP的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.2 防御素研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 防御的定义及分类 | 第15页 |
| 1.2.2 防御的生物活性及作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 禽 β-防御素研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 禽TLR与细胞因子简介 | 第17-18页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌种、质粒、实验动物及病毒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 主要应用软件 | 第20-21页 |
| 2.2 鹅Av BD4、7、12、16基因的克隆与序列分析 | 第21-25页 |
| 2.2.1 动物感染实验及组织样品的采集 | 第21页 |
| 2.2.2 提取鹅法氏囊、脾脏、骨髓组织总RNA | 第21页 |
| 2.2.3 RT-PCR | 第21-23页 |
| 2.2.4 RT-PCR产物的回收 | 第23页 |
| 2.2.5 PCR产物的连接 | 第23页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第24页 |
| 2.2.8 碱裂解法质粒的提取 | 第24页 |
| 2.2.9 重组质粒的PCR鉴定与测序 | 第24-25页 |
| 2.2.10 基因序列分析及同源性比较 | 第25页 |
| 2.3 重组鹅Av BD4、7、12、16蛋白的原核表达 | 第25-29页 |
| 2.3.1 原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.3.2 重组鹅Av BD4、7、12、16蛋白的诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.3.3 重组鹅Av BD4、7、12、16蛋白的复性纯化 | 第28-29页 |
| 2.4 重组鹅Av BD4、7、12、16蛋白的抗菌活性测定 | 第29页 |
| 2.5 不同Na Cl浓度对鹅Av BD4、7、12、16重组蛋白抗菌活性影响 | 第29页 |
| 2.6 重组鹅Av BD4、7、12、16蛋白的溶血试验 | 第29页 |
| 2.7 鹅Av BDs、TLRs、细胞因子经NDV诱导后的组织表达差异 | 第29-33页 |
| 2.7.1 试验动物及组织样品的采集 | 第29页 |
| 2.7.2 荧光定量引物的设计 | 第29-31页 |
| 2.7.3 荧光定量标准品的制备 | 第31-32页 |
| 2.7.4 制备样品组织总RNA | 第32页 |
| 2.7.5 鹅Av BDs、TLR、i NOS及细胞因子基因以及病毒载量的检测 | 第32-33页 |
| 2.8 重组鹅Av BD4、Av BD16蛋白体外抗病毒活性的测定 | 第33页 |
| 2.9 数据统计分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-77页 |
| 3.1 鹅Av BDs、TLRs、i NOS及细胞因子基因的克隆与鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2 测序结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3 鹅Av BD 4、7、12和16基因的遗传进化分析 | 第39-41页 |
| 3.4 重组鹅Av BD4、7、12、16蛋白的原核表达 | 第41-44页 |
| 3.4.1 构建表达用重组表达质粒p Pro EX-goose Av BDs及鉴定 | 第41-42页 |
| 3.4.2 重组鹅Av BDs蛋白的原核表达与纯化 | 第42-44页 |
| 3.5 检测重组鹅Av BD4、7、12、16及His标签蛋白的抗菌活性 | 第44-46页 |
| 3.6 不同Na Cl浓度对鹅Av BDs重组蛋白抗菌活性的影响 | 第46页 |
| 3.7 重组鹅Av BDs蛋白对鸡血红胞的溶血活性 | 第46-47页 |
| 3.8 鹅组织中病毒载量 | 第47-48页 |
| 3.9 NDV感染后鹅组织Av BDs表达变化 | 第48页 |
| 3.10 鹅脾脏组织中的病毒载量与组织中Av BDs的相关性分析 | 第48-59页 |
| 3.11 鹅TLR、i NOS及细胞因子经NDV诱导后组织表达差异 | 第59-76页 |
| 3.12 重组鹅Av BD4、Av BD16蛋白体外抗病毒活性 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-82页 |
| 4.1 鹅Av BDs基因分离鉴定及生物学活性分析 | 第77-78页 |
| 4.2 鹅感染Go/CH/LHLJ/1/06病毒后组织中病毒载量 | 第78页 |
| 4.3 经NDV诱导后鹅组织Av BDs表达差异 | 第78-79页 |
| 4.4 鹅TLRs、细胞因子经NDV诱导后组织表达差异 | 第79-81页 |
| 4.5 重组鹅Av BD4、Av BD16蛋白的体外抗病毒活性 | 第81-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-97页 |
| 附录 | 第97-107页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第107-108页 |
