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打靶于CREPT的microRNA的筛选及功能研究

摘要第5-6页
ABSTRACT第6-7页
第1章 绪论第10-19页
    1.1 micro RNA的介绍第10-15页
        1.1.1 miRNA的产生及作用机理第10-11页
        1.1.2 miRNA的功能及研究进展第11-15页
    1.2 CREPT的研究进展第15-16页
    1.3 miR-194的研究现状第16-17页
    1.4 本论文的研究目的及主要内容第17-19页
第2章 实验材料与方法第19-34页
    2.1 菌种和细胞第19页
    2.2 试剂和抗体第19-21页
    2.3 主要仪器与设备第21页
    2.4 载体构建第21-26页
        2.4.1 质粒提取第21-24页
        2.4.2 载体构建第24-26页
    2.5 细胞培养第26页
    2.6 细胞转染(以6孔板为例)第26-27页
    2.7 丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE和免疫印记 (Western blot)第27-29页
    2.8 细胞增殖能力测定第29-30页
        2.8.1 MTT法第29-30页
        2.8.2 细胞计数法第30页
    2.9 克隆形成实验(Colony Formation Assay)(以6孔板为例)第30页
    2.10 双荧光素酶报告实验(Luciferase Reporter)第30-32页
        2.10.1 细胞转染第30-31页
        2.10.2 Luciferase Reporter基因检测第31-32页
    2.11 细胞周期实验第32-34页
第3章 打靶于CREPT的MIRNAS的筛选第34-48页
    3.1 软件预测miRNA第34-35页
    3.2 正常结肠上皮细胞株和结直肠癌细胞株中CREPT蛋白表达情况分析第35-36页
    3.3 数据库和文献筛选打靶于CREPT的miRNAs第36-40页
        3.3.1 文献筛选miR-182第36-38页
        3.3.2 文献筛选miR-192第38-39页
        3.3.3 文献筛选miR-383第39页
        3.3.4 文献筛选miR-194第39-40页
    3.4 备选miRNAs对CREPT蛋白表达的影响第40-41页
    3.5 miR 194对CREPT蛋白表达水平的影响的确证第41-42页
    3.6 miR-194对CREPT蛋白表达水平影响的剂量效应和时间效应分析第42-44页
    3.7 miR-194与CREPT mRNA 3’UTR的精确结合位点的确定第44-46页
    3.8 本章小结第46-48页
第4章 所筛选MIRNA在CRC中的功能研究第48-64页
    4.1 miR-194对HCT 116β/W细胞生长的影响第48-51页
        4.1.1 miR-194对HCT 116β/W细胞生长的影响第48-49页
        4.1.2 miR-194对HCT 116β/W增殖的影响第49-50页
        4.1.3 miR-194对HCT 116β/W克隆形成能力的影响第50-51页
    4.2 miR-194对HCT 116β/W细胞细胞周期的影响第51-55页
    4.3 miR-194对Wnt信号通路的影响第55-56页
    4.4 miR-194对下游基因相关蛋白的影响第56-61页
    4.5 miR-194对NF-κB信号通路的影响第61-62页
    4.6 miR-194打靶于CREPT后抑制肿瘤生长的作用模型第62页
    4.7 本章小结第62-64页
结论第64-65页
参考文献第65-72页
附录第72-84页
攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果第84-85页
致谢第85页

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