摘要 | 第5-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
第1章 绪论 | 第10-19页 |
1.1 micro RNA的介绍 | 第10-15页 |
1.1.1 miRNA的产生及作用机理 | 第10-11页 |
1.1.2 miRNA的功能及研究进展 | 第11-15页 |
1.2 CREPT的研究进展 | 第15-16页 |
1.3 miR-194的研究现状 | 第16-17页 |
1.4 本论文的研究目的及主要内容 | 第17-19页 |
第2章 实验材料与方法 | 第19-34页 |
2.1 菌种和细胞 | 第19页 |
2.2 试剂和抗体 | 第19-21页 |
2.3 主要仪器与设备 | 第21页 |
2.4 载体构建 | 第21-26页 |
2.4.1 质粒提取 | 第21-24页 |
2.4.2 载体构建 | 第24-26页 |
2.5 细胞培养 | 第26页 |
2.6 细胞转染(以6孔板为例) | 第26-27页 |
2.7 丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE和免疫印记 (Western blot) | 第27-29页 |
2.8 细胞增殖能力测定 | 第29-30页 |
2.8.1 MTT法 | 第29-30页 |
2.8.2 细胞计数法 | 第30页 |
2.9 克隆形成实验(Colony Formation Assay)(以6孔板为例) | 第30页 |
2.10 双荧光素酶报告实验(Luciferase Reporter) | 第30-32页 |
2.10.1 细胞转染 | 第30-31页 |
2.10.2 Luciferase Reporter基因检测 | 第31-32页 |
2.11 细胞周期实验 | 第32-34页 |
第3章 打靶于CREPT的MIRNAS的筛选 | 第34-48页 |
3.1 软件预测miRNA | 第34-35页 |
3.2 正常结肠上皮细胞株和结直肠癌细胞株中CREPT蛋白表达情况分析 | 第35-36页 |
3.3 数据库和文献筛选打靶于CREPT的miRNAs | 第36-40页 |
3.3.1 文献筛选miR-182 | 第36-38页 |
3.3.2 文献筛选miR-192 | 第38-39页 |
3.3.3 文献筛选miR-383 | 第39页 |
3.3.4 文献筛选miR-194 | 第39-40页 |
3.4 备选miRNAs对CREPT蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
3.5 miR 194对CREPT蛋白表达水平的影响的确证 | 第41-42页 |
3.6 miR-194对CREPT蛋白表达水平影响的剂量效应和时间效应分析 | 第42-44页 |
3.7 miR-194与CREPT mRNA 3’UTR的精确结合位点的确定 | 第44-46页 |
3.8 本章小结 | 第46-48页 |
第4章 所筛选MIRNA在CRC中的功能研究 | 第48-64页 |
4.1 miR-194对HCT 116β/W细胞生长的影响 | 第48-51页 |
4.1.1 miR-194对HCT 116β/W细胞生长的影响 | 第48-49页 |
4.1.2 miR-194对HCT 116β/W增殖的影响 | 第49-50页 |
4.1.3 miR-194对HCT 116β/W克隆形成能力的影响 | 第50-51页 |
4.2 miR-194对HCT 116β/W细胞细胞周期的影响 | 第51-55页 |
4.3 miR-194对Wnt信号通路的影响 | 第55-56页 |
4.4 miR-194对下游基因相关蛋白的影响 | 第56-61页 |
4.5 miR-194对NF-κB信号通路的影响 | 第61-62页 |
4.6 miR-194打靶于CREPT后抑制肿瘤生长的作用模型 | 第62页 |
4.7 本章小结 | 第62-64页 |
结论 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-72页 |
附录 | 第72-84页 |
攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第84-85页 |
致谢 | 第85页 |