| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 微生物Trk钟吸收系统研究进展 | 第12-31页 |
| 1.1 植物与微生物钾营养概况 | 第12页 |
| 1.2 土壤缺钾及盐渍化危害 | 第12-13页 |
| 1.3 微生物Trk钾吸收系统 | 第13-26页 |
| 1.3.1 原核微生物中的Trk系统 | 第15-21页 |
| 1.3.2 真核微生物中的Trk系统 | 第21-26页 |
| 1.3.3 Trk系统研究展望 | 第26页 |
| 1.4 宏基因组学发展概况 | 第26-29页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 2 海洋微生物trkH基因的克隆与序列分析 | 第31-61页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第31-32页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第31页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-50页 |
| 2.2.1 海洋微生物宏基因组DNA提取 | 第32页 |
| 2.2.2 海洋微生物trkH基因保守区的克隆 | 第32-38页 |
| 2.2.3 锚定PCR法克隆trkH基因5'端和3'端 | 第38-44页 |
| 2.2.4 海洋微生物trkH基因ORF的获得 | 第44-47页 |
| 2.2.5 海洋微生物trkH基因生物信息学分析 | 第47页 |
| 2.2.6 大肠杆菌Escherichia coli中EctrkH的克隆 | 第47-50页 |
| 2.3 结果与分析 | 第50-59页 |
| 2.3.1 海洋微生物宏基因组DNA提取 | 第50-51页 |
| 2.3.2 保守区的克隆 | 第51-52页 |
| 2.3.3 锚定PCR法克隆trkH基因5'端和3'端 | 第52-54页 |
| 2.3.4 海洋微生物trkH基因ORF的获得 | 第54-55页 |
| 2.3.5 海洋微生物trkH基因生物信息学分析 | 第55-58页 |
| 2.3.6 大肠杆菌Escherichia coli中EctrkH的克隆 | 第58-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59-60页 |
| 2.5 小结 | 第60-61页 |
| 3 酵母表达载体构建、遗传转化及功能分析 | 第61-84页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第61-62页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第61页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第61-62页 |
| 3.1.3 实验设备 | 第62页 |
| 3.2 实验方法 | 第62-72页 |
| 3.2.1 构建pYES2.0-trkH酵母表达载体 | 第63-66页 |
| 3.2.2 构建pYES2.0-EctrkH酵母表达载体 | 第66-68页 |
| 3.2.3 重组质粒的酵母遗传转化 | 第68-69页 |
| 3.2.4 转化酵母的分子检测 | 第69-70页 |
| 3.2.5 转化酵母的功能分析 | 第70-72页 |
| 3.3 结果与分析 | 第72-81页 |
| 3.3.1 构建pYES2.0-trkH酵母表达载体 | 第72-73页 |
| 3.3.2 构建pYES2.0-EctrkH酵母表达载体 | 第73-75页 |
| 3.3.3 重组质粒的酵母遗传转化 | 第75-76页 |
| 3.3.4 转化酵母的功能分析 | 第76-81页 |
| 3.4 讨论 | 第81-83页 |
| 3.5 小结 | 第83-84页 |
| 4 构建植物表达载体并转化拟南芥 | 第84-97页 |
| 4.1 实验材料及设备 | 第84-85页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第84页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第84页 |
| 4.1.3 实验设备 | 第84-85页 |
| 4.2 实验方法 | 第85-91页 |
| 4.2.1 trkH基因植物表达载体构建 | 第85-88页 |
| 4.2.2 重组质粒转化农杆菌EHA101 | 第88-89页 |
| 4.2.3 农杆菌转化拟南芥 | 第89-91页 |
| 4.2.4 转基因拟南芥Basta筛选 | 第91页 |
| 4.2.5 转基因拟南芥分子检测 | 第91页 |
| 4.3 实验结果 | 第91-95页 |
| 4.3.1 trkH基因植物表达载体构建 | 第91-93页 |
| 4.3.2 重组质粒转化农杆菌EHA101 | 第93-94页 |
| 4.3.3 转基因拟南芥Basta筛选 | 第94页 |
| 4.3.4 转基因拟南芥分子检测 | 第94-95页 |
| 4.4 讨论 | 第95-96页 |
| 4.5 小结 | 第96-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 展望 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-104页 |
| 附录A 缩略语 | 第104-105页 |
| 附录B 论文中所用的DNA Marker | 第105-106页 |
| 附录C 论文中所用的质粒图谱 | 第106-108页 |
| 附录D trkH基因完整ORF序列 | 第108页 |
| 附录E trkH基因编码的氨基酸序列 | 第108-109页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
