| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 细胞内检测的荧光方法 | 第11-15页 |
| 1.1.1 分子荧光分析法 | 第11页 |
| 1.1.2 荧光蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1.3 蛋白质特异性小分子荧光标记技术 | 第12-15页 |
| 1.2 SNAP-tag的应用研究进展 | 第15-21页 |
| 1.2.1 SNAP-tag在荧光成像领域的应用 | 第16-18页 |
| 1.2.2 SNAP-tag在细胞内蛋白质性质与功能研究中的应用 | 第18-20页 |
| 1.2.3 SNAP-tag在其他方面的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.4 SNAP-tag的发展前景 | 第21页 |
| 1.3 过氧化物酶体 | 第21-24页 |
| 1.3.1 过氧化物酶体 | 第21-23页 |
| 1.3.2 过氧化物酶体中的NO | 第23-24页 |
| 1.4 本论文选题依据与研究内容 | 第24-25页 |
| 2 SNAP-tag蛋白原核表达与体外荧光标记 | 第25-43页 |
| 2.1 原核表达实验流程图 | 第25页 |
| 2.2 实验材料与实验设备 | 第25-29页 |
| 2.2.1 实验菌株及载体 | 第25-26页 |
| 2.2.2 实验试剂及酶 | 第26页 |
| 2.2.3 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.2.4 实验设备 | 第27-28页 |
| 2.2.5 溶液配制 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.3.1 SNAP-tag质粒与pET-28a进行重组质粒的构建 | 第29-32页 |
| 2.3.2 SNAP-tag蛋白的原核表达与纯化 | 第32-35页 |
| 2.3.3 SNAP-tag蛋白的体外标记与光谱测定 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.4.1 SNAP—pET-28a重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.4.2 SNAP-tag蛋白的诱导表达 | 第37-40页 |
| 2.4.3 SNAP-tag蛋白的体外标记与光谱测定 | 第40-42页 |
| 2.5 小结 | 第42-43页 |
| 3 过氧化物酶体SNAP-tag体系的构建与荧光标记应用 | 第43-71页 |
| 3.1 实验原理简图与流程图 | 第43-45页 |
| 3.1.1 实验原理简图 | 第43-44页 |
| 3.1.2 真核表达载体构建流程图 | 第44-45页 |
| 3.2 实验材料与实验设备 | 第45-47页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第46-47页 |
| 3.2.3 实验设备 | 第47页 |
| 3.2.4 溶液配制 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-57页 |
| 3.3.1 pSNAP-PTS1真核重组质粒的构建 | 第47-51页 |
| 3.3.2 pCLIP-PTS1真核重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.3 EGFP-PTS1真核重组质粒的构建 | 第52页 |
| 3.3.4 细胞复苏 | 第52-53页 |
| 3.3.5 细胞传代 | 第53页 |
| 3.3.6 细胞冻存 | 第53页 |
| 3.3.7 G418抗性筛选 | 第53-54页 |
| 3.3.8 细胞稳定转染与筛选 | 第54-55页 |
| 3.3.9 pEGFP-PTS1重组质粒的瞬时转染 | 第55页 |
| 3.3.10 细胞成像 | 第55-57页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第57-68页 |
| 3.4.1 pMD19-T-SNAP-PTS1重组质粒构建 | 第57页 |
| 3.4.2 pSNAP-PTS1真核重组质粒的构建 | 第57-59页 |
| 3.4.3 COS-7细胞筛选细胞密度及G418浓度的确定 | 第59页 |
| 3.4.4 细胞稳定转染与筛选 | 第59页 |
| 3.4.5 稳定转染pSNAP-PTS1重组质粒的细胞成像 | 第59-61页 |
| 3.4.6 EGFP-PTS1真核重组质粒的构建 | 第61-63页 |
| 3.4.7 pEGFP-PTS1真核重组质粒的细胞转染 | 第63页 |
| 3.4.8 EGFP-PTS1与SNAP-PTS1蛋白共表达细胞成像 | 第63-66页 |
| 3.4.9 SNAP-PTS1蛋白的双色荧光标记 | 第66-68页 |
| 3.5 过氧化物酶体荧光标记应用 | 第68-69页 |
| 3.6 小结 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
