| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第14-24页 |
| 第一章 体外表达重组Cas9蛋白以及活性检测 | 第24-42页 |
| 一 引言 | 第24-25页 |
| 二 材料与方法 | 第25-34页 |
| 2.1 主要实验试剂与仪器 | 第25-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-34页 |
| 三 结果与讨论 | 第34-40页 |
| 3.1 His6-Cas9重组蛋白的体外纯化 | 第34-36页 |
| 3.2 His6MBP-Cas9重组蛋白的体外纯化 | 第36-38页 |
| 3.3 通过离子交换柱纯化His6MBP-Cas9 | 第38-39页 |
| 3.4 体外重组Cas9蛋白的功能鉴定 | 第39-40页 |
| 四 结语 | 第40-42页 |
| 第二章 利用Cas9蛋白构建带有点突变的小鼠 | 第42-61页 |
| 一 引言 | 第42-43页 |
| 二 材料与方法 | 第43-53页 |
| 2.1 主要实验试剂与仪器 | 第43-47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-53页 |
| 三 结果与讨论 | 第53-60页 |
| 3.1 His6-Cas9蛋白介导的点突变 | 第53-56页 |
| 3.2 F1代小鼠基因型的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.3 重组ffis6-Cas9体内脱靴活性的检测 | 第57-60页 |
| 四 结语 | 第60-61页 |
| 第三章 利用重组Cas9蛋白敲除基因组中长片段DNA | 第61-74页 |
| 一 引言 | 第61-62页 |
| 二 材料与方法 | 第62-66页 |
| 2.1 主要实验试剂及仪器 | 第62-64页 |
| 2.2 实验方法 | 第64-66页 |
| 三 结果与讨论 | 第66-72页 |
| 3.1 大鼠Fah基因的敲除 | 第66-68页 |
| 3.2 小鼠体内大片段DNA的敲除 | 第68-72页 |
| 四 结语 | 第72-74页 |
| 第四章 Cas9蛋白介导的长片段DNA的整合及功能的鉴定 | 第74-91页 |
| 一 引言 | 第74-75页 |
| 二 材料与方法 | 第75-80页 |
| 2.1 主要实验试剂与仪器 | 第75-78页 |
| 2.2 实验方法 | 第78-80页 |
| 三 结果与讨论 | 第80-88页 |
| 3.1 在Nfac1位点插入IRES-CreERT2-polyA及其功能的鉴定 | 第80-83页 |
| 3.2 在大鼠的Lgr5位点插入Gene trap元件SA-GFP-pA并验证其功能 | 第83-88页 |
| 四 结语 | 第88-91页 |
| 第五章 问题与展望 | 第91-94页 |
| 第六章 综述 | 第94-105页 |
| 参考文献 | 第105-120页 |
| 科研成果 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
