| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-27页 |
| 1.1 动物胚胎发育中的表观遗传事件 | 第20-23页 |
| 1.1.1 自然状态下的哺乳动物早期胚胎发育中的重编程 | 第20-22页 |
| 1.1.2 体细胞核移植哺乳动物早期胚胎发育中的重编程 | 第22-23页 |
| 1.2 转基因克隆动物的外源基因沉默的相关研究 | 第23-25页 |
| 1.2.1 染色体位置效应 | 第24页 |
| 1.2.2 外源基因的表观遗传学修饰 | 第24-25页 |
| 1.3 5氮杂胞苷及曲古抑菌素A的应用研究 | 第25-27页 |
| 1.3.1 5氮杂胞苷的应用 | 第25-26页 |
| 1.3.2 曲古抑菌素A的应用 | 第26-27页 |
| 第二章 转基因白绒山羊外源基因表达情况及其细胞培养与外源基因功能鉴定 | 第27-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第28页 |
| 2.1.2 实验细胞系 | 第28页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第28页 |
| 2.1.4 实验试剂与耗材 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 转基因白绒山羊的全身水平红色荧光表达情况的观察 | 第29页 |
| 2.2.2 转基因白绒山羊体外培养细胞的获得 | 第29-30页 |
| 2.2.3 基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.4 转基因白绒山羊的PCR鉴定 | 第31-33页 |
| 2.2.5 克隆载体转染CFC3成纤维细胞 | 第33页 |
| 2.2.6 细胞总RNA提取与体外反转录反应 | 第33-35页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR反应 | 第35页 |
| 2.2.8 转基因绒白绒山羊细胞中DsRed红色荧光蛋白的Western Blotting检测 | 第35-37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-45页 |
| 2.3.1 转基因白绒山羊全身及细胞水平外源DsRed基因表达情况的观察 | 第37-41页 |
| 2.3.2 转基因白绒山羊外源基因完整性与功能鉴定 | 第41-43页 |
| 2.3.3 转基因白绒山羊外源DsRed基因表达情况研究 | 第43-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 转基因白绒山羊外源基因表达与其拷贝数及启动子甲基化水平关系的研究 | 第47-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 实验细胞系 | 第47页 |
| 3.1.2 实验设备 | 第47页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第47-48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-53页 |
| 3.2.1 细胞培养与收集 | 第48页 |
| 3.2.2 转基因白绒山羊基因组DNA的提取 | 第48页 |
| 3.2.3 外源DsRed基因拷贝数检测 | 第48-50页 |
| 3.2.4 外源DsRed基因CMV启动子甲基化水平检测 | 第50-53页 |
| 3.2.5 SPSS软件分析外源基因表达量与拷贝数和CMV启动子甲基化水平间的相关性 | 第53页 |
| 3.3 实验结果 | 第53-63页 |
| 3.3.1 转基因白绒山羊外源基因拷贝数鉴定与DsRed基因表达量的关系 | 第53-56页 |
| 3.3.2 转基因白绒山羊耳尖成纤维细胞外源CMV启动子甲基化水平检测 | 第56-63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 转基因白绒山羊来源体细胞中沉默外源基因的复活表达的研究 | 第65-91页 |
| 4.1 实验材料 | 第65-66页 |
| 4.1.1 实验细胞系及卵母细胞 | 第65页 |
| 4.1.2 实验设备 | 第65-66页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 4.2.1 细胞培养与收集 | 第66-67页 |
| 4.2.2 转基因白绒山羊细胞5-Az与TSA处理最适浓度筛选 | 第67页 |
| 4.2.3 经不同药物处理细胞的DsRed mRNA表达量的检测 | 第67页 |
| 4.2.4 使用最适5-Az与TSA浓度处理转基因白绒山羊耳尖成纤维细胞 | 第67页 |
| 4.2.5 荧光相差显微镜观察贴壁培养细胞 | 第67-68页 |
| 4.2.6 5-Az和TSA最适处理浓度处理细胞的RT-qPCR和Western Blotting检测 | 第68页 |
| 4.2.7 5-Az处理细胞外源基因CMV启动子的甲基化分析 | 第68页 |
| 4.2.8 统计学分析 | 第68页 |
| 4.2.9 卵母细胞的采集与体外成熟 | 第68-69页 |
| 4.2.10 核移植供体细胞的准备 | 第69页 |
| 4.2.11 体细胞核移植操作 | 第69页 |
| 4.2.12 克隆重构胚的体外培养 | 第69-70页 |
| 4.3 实验结果 | 第70-89页 |
| 4.3.1 5-Az处理转基因白绒山羊细胞及其对外源DsRed基因的影响 | 第70-74页 |
| 4.3.2 经5-Az处理后外源CMV启动子甲基化水平的变化情况 | 第74-82页 |
| 4.3.3 TSA处理转基因白绒山羊细胞及其对外源DsRed基因表达的影响 | 第82-87页 |
| 4.3.4 ANCOVA分析5-Az和TSA药物使用效果 | 第87-88页 |
| 4.3.5 转基因白绒山羊耳尖成纤维细胞的再克隆 | 第88-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第100页 |
