| 致谢 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-39页 |
| 1.1 CRL4泛素连接酶 | 第18-25页 |
| 1.1.1 Cullin-RING E3泛素连接酶(CRLs) | 第18-20页 |
| 1.1.2 CRL4 E3泛素连接酶的结构组成 | 第20-21页 |
| 1.1.3 DDB1-CUL4相关因子 | 第21-23页 |
| 1.1.4 CRL4的参与调节染色质动态变化 | 第23-25页 |
| 1.2 线虫是一种传统的模式动物 | 第25-31页 |
| 1.2.1 C.elegans被发展成模式动物的几个优点 | 第25-29页 |
| 1.2.2 线虫的生殖系统发育过程 | 第29-31页 |
| 1.3 TALEN制作基因敲除小鼠 | 第31-34页 |
| 1.3.1 TALEN的结构原理 | 第31-32页 |
| 1.3.2 TALEN质粒的组装及制作敲除小鼠 | 第32-34页 |
| 1.4 早期胚胎发育中的染色质重构 | 第34-39页 |
| 1.4.1 小鼠早期胚胎发育过程 | 第34-36页 |
| 1.4.2 早期胚胎发育过程中的染色质结构动态变化 | 第36-37页 |
| 1.4.3 早期胚胎发育过程中的组蛋白修饰变化 | 第37-39页 |
| 第二章 材料与方法 | 第39-69页 |
| 2.1 实验仪器及耗材 | 第39-41页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第39-40页 |
| 2.1.2 实验耗材 | 第40-41页 |
| 2.2 实验材料 | 第41-46页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第41-42页 |
| 2.2.2 实验细胞系 | 第42-43页 |
| 2.2.3 常用试剂 | 第43-46页 |
| 2.3 常用缓冲液配方 | 第46-55页 |
| 2.3.1 C.elegans相关缓冲液 | 第46-47页 |
| 2.3.2 分子克隆相关缓冲液 | 第47-48页 |
| 2.3.3 蛋白免疫印迹缓冲液 | 第48-52页 |
| 2.3.4 免疫荧光缓冲液 | 第52-53页 |
| 2.3.5 小鼠基因型鉴定相关缓冲液 | 第53-55页 |
| 2.4 实验方法步骤 | 第55-69页 |
| 2.4.1 利用TALEN技术制作Dcaf13敲除小鼠 | 第55-56页 |
| 2.4.2 小鼠基因型鉴定 | 第56-58页 |
| 2.4.3 卵母细胞和早期胚胎的收集及其体外培养 | 第58-59页 |
| 2.4.4 RNA显微注射 | 第59页 |
| 2.4.5 免疫荧光实验 | 第59-60页 |
| 2.4.6 质粒构建 | 第60-62页 |
| 2.4.7 实时定量PCR | 第62-64页 |
| 2.4.8 质粒或siRNA转染 | 第64页 |
| 2.4.9 流式细胞仪检测细胞周期 | 第64页 |
| 2.4.10 MTT细胞增殖能力检测 | 第64-65页 |
| 2.4.11 克隆形成实验 | 第65页 |
| 2.4.12 蛋白质免疫共沉淀 | 第65页 |
| 2.4.13 体内泛素化检测 | 第65-66页 |
| 2.4.14 Western blot | 第66-67页 |
| 2.4.15 单胚胎RNA-seq | 第67-69页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第69-107页 |
| 3.1 线虫RNAi结果显示zk430.7调节生殖发育 | 第69-73页 |
| 3.1.1 线虫feeding RNAi的筛选目录及过程 | 第69-70页 |
| 3.1.2 线虫RNAi结果发现CRL4在调节生殖发育中起重要作用 | 第70-71页 |
| 3.1.3 Dcaf13是一个进化极其保守的基因 | 第71-73页 |
| 3.1.4 小结与讨论 | 第73页 |
| 3.2 DCAF13是一个位于细胞核及核仁的DCAF | 第73-78页 |
| 3.2.1 DCAF13的WD40结构域与DDB1相互作用 | 第73-74页 |
| 3.2.2 过表达的DCAF13定位于细胞核及核仁 | 第74-75页 |
| 3.2.3 414 RRRKEMNRRK423是DCAF13的核仁定位序列 | 第75-76页 |
| 3.2.4 内源DCAF13是一个细胞核及核仁蛋白 | 第76-78页 |
| 3.2.5 小结与讨论 | 第78页 |
| 3.3 Dcaf13敲除早期胚胎植入前致死 | 第78-83页 |
| 3.3.1 Dcaf13敲除小鼠的构建及鉴定 | 第78-80页 |
| 3.3.2 基因型鉴定发现Dcaf13敲除早期胚胎植入前致死 | 第80-81页 |
| 3.3.3 免疫荧光染色发现Dcaf13敲除早期胚胎植入前致死 | 第81-82页 |
| 3.3.4 小结与讨论 | 第82-83页 |
| 3.4 DCAF13在植入前早期胚胎发育中逐渐表达 | 第83-85页 |
| 3.4.1 Dcaf13 mRNA在早期胚胎发育中高表达 | 第83-84页 |
| 3.4.2 DCAF13蛋白在小鼠植入前早期胚胎发育中逐渐累积 | 第84-85页 |
| 3.4.3 小结与讨论 | 第85页 |
| 3.5 Dcaf13 RNA干扰后胚胎H3K9me3及SUV39H1升高 | 第85-88页 |
| 3.5.1 Dcaf13 RNA干扰后胚胎表型同敲除Dcaf13一致 | 第85-87页 |
| 3.5.2 Dcaf13 RNA干扰后胚胎H3K9me3及SUV39H1升高 | 第87-88页 |
| 3.5.3 小结与讨论 | 第88页 |
| 3.6 细胞系中RNA干扰Dcaf13使细胞核异染色质化 | 第88-93页 |
| 3.6.1 在HeLa细胞中RNA干扰Dcaf13使细胞形态变圆、细胞核皱缩 | 第88-90页 |
| 3.6.2 RNA干扰Dcaf13后的HeLa细胞没有发生明显凋亡 | 第90-92页 |
| 3.6.3 RNA干扰Dcaf13后H3K9me3及HP1升高 | 第92-93页 |
| 3.6.4 小结与讨论 | 第93页 |
| 3.7 细胞系中SUV39H1被CRL4~(DCAF13)多聚泛素化 | 第93-97页 |
| 3.7.1 SUV39H1能够直接与DDB1和DCAF13相互作用 | 第93-94页 |
| 3.7.2 SUV39H1的多聚泛素化被DDB1和DCAF13影响 | 第94-95页 |
| 3.7.3 SUV39H1的K78、K121、K138被CRL4~(DCAF13)多聚泛素化 | 第95-96页 |
| 3.7.4 过表达DCAF13后SUV39H1量减少 | 第96页 |
| 3.7.5 小结与讨论 | 第96-97页 |
| 3.8 过表达SUV39H1与敲除Dcaf13表型类似 | 第97-102页 |
| 3.8.1 构建出SUV39H1催化活性丧失的突变质粒 | 第97-98页 |
| 3.8.2 过表达SUV39H1后胚胎发育率显著降低 | 第98-99页 |
| 3.8.3 mCherry-SUV39H1在早期胚胎发育中逐渐被降解 | 第99-100页 |
| 3.8.4 过表达SUV39H1的胚胎中H3K9me3及HP1升高 | 第100-101页 |
| 3.8.5 小结与讨论 | 第101-102页 |
| 3.9 Dcaf13 RNA干扰的胚胎谱系决定的基因表达明显降低 | 第102-107页 |
| 3.9.1 Dcaf13 RNAi后Cdx2与Nanog的mRNA表达显著降低 | 第102-103页 |
| 3.9.2 Dcaf13 RNAi后CDX2与NANOG蛋白表达显著降低 | 第103-104页 |
| 3.9.3 Dcaf13 RNA干扰后没有显著影响OCT4的蛋白水平 | 第104-105页 |
| 3.9.4 小结与讨论 | 第105-107页 |
| 第四章 总结讨论 | 第107-111页 |
| 4.1 总结 | 第107-108页 |
| 4.2 讨论 | 第108-111页 |
| 第五章 文献综述 | 第111-119页 |
| 参考文献 | 第119-131页 |
| 附录 | 第131-135页 |
| 作者简历 | 第135-136页 |
