| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-38页 |
| 1.1 核糖开关的研究历史 | 第12-13页 |
| 1.2 核糖开关结构及分类 | 第13-19页 |
| 1.2.1 核糖开关结构 | 第13-15页 |
| 1.2.2 核糖开关的分类 | 第15-17页 |
| 1.2.3 串联的核糖开关 | 第17-18页 |
| 1.2.4 核糖开关分布 | 第18-19页 |
| 1.3 核糖开关的功能 | 第19-24页 |
| 1.3.1 维持体内代谢平衡 | 第19-20页 |
| 1.3.2 参与细胞内信号传导 | 第20页 |
| 1.3.3 核糖开关对基因表达的调控 | 第20-24页 |
| 1.4 基于RNA的基因表达调控 | 第24-29页 |
| 1.4.1 基于适配体的基因调控 | 第24页 |
| 1.4.2 适配体在原核生物中的应用 | 第24-26页 |
| 1.4.3 适配体在真核生物中的应用 | 第26-27页 |
| 1.4.4 核酶 | 第27-29页 |
| 1.5 人工构建的核糖开关的表达调控 | 第29-34页 |
| 1.5.1 依赖小分子配体的变构核酶 | 第30-33页 |
| 1.5.2 依赖特殊配体的变构核酶 | 第33-34页 |
| 1.6 人工变构核酶的运用 | 第34-35页 |
| 1.6.1 人工变构核酶在原核生物中的运用 | 第34页 |
| 1.6.2 人工变构核酶在真核生物中的运用 | 第34-35页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第35-38页 |
| 第二章 核酶开关对HSV-TK/GCV在肿瘤细胞表达的调控 | 第38-72页 |
| 2.1 引言 | 第38-39页 |
| 2.2 实验材料 | 第39-42页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第39页 |
| 2.2.2 细胞系 | 第39-40页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第40页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第40-41页 |
| 2.2.5 溶液及培养基配置 | 第41-42页 |
| 2.3 实验方法 | 第42-57页 |
| 2.3.1 核酶开关的构建 | 第42-48页 |
| 2.3.2 细胞培养及瞬时转染 | 第48-49页 |
| 2.3.3 pTK-EGFP -Theo-HHR-B质粒的构建: | 第49-52页 |
| 2.3.4 建立稳定转染pTK-EGFP-Theo-HHR-B的HeLa细胞系 | 第52-53页 |
| 2.3.5 稳定转染pTK -EGFP -Theo-HHR-B的HeLa细胞系在不同浓度茶碱中EGFP表达水平的检测 | 第53页 |
| 2.3.6 qRT-PCR对TK基因mRNA水平的表达检测 | 第53-55页 |
| 2.3.7 Western Blot检测核酶开关对TK基因表达的调控 | 第55-56页 |
| 2.3.8 MTT检测核酶开关调控TK基因对肿瘤细胞杀伤力的影响 | 第56-57页 |
| 2.3.9 qRT-PCR检测核酶开关对基因表达的动态调节行为 | 第57页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第57-70页 |
| 2.4.1 重叠延伸PCR方法构建载体 | 第57-58页 |
| 2.4.2 细胞内EGFP表达的荧光显微镜观察与流式细胞仪分析 | 第58-61页 |
| 2.4.3 核酶开关适体对茶碱分子的特异性 | 第61-62页 |
| 2.4.4 TK-EGFP-Theo-HHR-B重组表达载体鉴定 | 第62-63页 |
| 2.4.5 建立稳定转染TK-EGFP-Theo-HHR-B的HeLa细胞系 | 第63页 |
| 2.4.6 不同浓度茶碱对TK-EGFP-Theo-HHR-B细胞系EGFP的表达调控 | 第63-66页 |
| 2.4.7 不同浓度茶碱对核酶开关调控TK基因蛋白表达的影响 | 第66-67页 |
| 2.4.8 核酶开关对基因表达的动态调节行为 | 第67-68页 |
| 2.4.9 不同浓度茶碱对核酶开关调控细胞的GCV敏感性的调节 | 第68-70页 |
| 2.5 本章小结与展望 | 第70-72页 |
| 第三章 HDV核酶开关对肿瘤抗凋亡基因BCL-2干扰表达的调控 | 第72-88页 |
| 3.1 引言 | 第72-74页 |
| 3.2 实验材料 | 第74-75页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第74-75页 |
| 3.2.2 溶液及培养基配置 | 第75页 |
| 3.3 实验方法 | 第75-77页 |
| 3.3.1 基于EGFP的RNAi核酶开关载体的构建 | 第75页 |
| 3.3.2 细胞培养及瞬时转染、EGFP荧光表达检测 | 第75-76页 |
| 3.3.3 基于调节抗凋亡基因Bcl-2 RNAi的核酶开关载体的构建 | 第76页 |
| 3.3.4 qRT-PCR检测转染后细胞在不同浓度茶碱作用下Bcl-2转录水平 | 第76-77页 |
| 3.3.5 Western Blot检测转染后细胞在不同浓度茶碱作用下Bcl-2蛋白表达水平 | 第77页 |
| 3.3.6 不同浓度茶碱作用下转染细胞凋亡检测 | 第77页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第77-87页 |
| 3.4.1 基于调节报告基因EGFP RNAi的核酶开关的构建 | 第77-79页 |
| 3.4.2 核酶开关调控肿瘤细胞内EGFP表达的分析 | 第79-82页 |
| 3.4.3 核酶开关调控肿瘤细胞Bcl-2基因mRNA水平的检测 | 第82-85页 |
| 3.4.4 核酶开关调控肿瘤细胞Bcl-2基因蛋白表达的检测 | 第85页 |
| 3.4.5 核酶开关调控肿瘤细胞凋亡的检测 | 第85-87页 |
| 3.5 本章小结及展望 | 第87-88页 |
| 第四章 基于核酶开关的哺乳细胞内TPP的荧光生物传感器的研究 | 第88-98页 |
| 4.1 引言 | 第88-89页 |
| 4.2 实验材料 | 第89-90页 |
| 4.2.1 菌株、质粒和细胞系 | 第89页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第89页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第89-90页 |
| 4.2.4 溶液及培养基配置 | 第90页 |
| 4.2.5 引物和质粒构建列表 | 第90页 |
| 4.3 实验方法 | 第90-92页 |
| 4.3.1 哺乳细胞中TPP核酶开关质粒的构建 | 第90-91页 |
| 4.3.2 细胞培养及瞬时转染 | 第91-92页 |
| 4.3.3 转染后细胞内EGFP表达的荧光显微镜观察与流式细胞仪分析 | 第92页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第92-96页 |
| 4.4.1 pEGFP-TPP-HHR-ON/OFF的质粒的构建 | 第92-93页 |
| 4.4.2 不同TPP浓度下HEK293细胞内EGFP基因表达分析 | 第93-96页 |
| 4.5 本章小结及展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-116页 |
| 附录 | 第116-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 博士期间发表文章 | 第122页 |
