| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1、植物先天免疫系统 | 第11-13页 |
| 1.1 PAMP诱发的免疫防卫反应 | 第12-13页 |
| 1.2 效应因子诱发的免疫防卫反应 | 第13页 |
| 2、水稻白叶枯病抗性机制相关研究概述 | 第13-15页 |
| 2.1 水稻抗白叶枯病研究现状 | 第13-14页 |
| 2.2 水稻白叶枯抗性基因Xa21研究概述 | 第14-15页 |
| 3、羟脯氨酸的功能及研究进展 | 第15-17页 |
| 3.1 羟脯氨酸与植物抗病性的关系 | 第15-16页 |
| 3.2 催化脯氨酸形成羟脯氨酸的重要酶类-脯氨酸羟化酶概述 | 第16-17页 |
| 4、本研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-32页 |
| 1 试验材料 | 第19-21页 |
| 1.1 供试水稻品种 | 第19页 |
| 1.2 菌株和载体 | 第19页 |
| 1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 1.5 培养基成分 | 第20-21页 |
| 1.5.1 细菌培养基的配制 | 第20页 |
| 1.5.2 水稻遗传转化所需要的培养基 | 第20-21页 |
| 2 试验方法 | 第21-32页 |
| 2.1 基因芯片数据分析和基因结构及蛋白结构分析 | 第21页 |
| 2.2 水稻Xrg1基因RNAi片段的扩增 | 第21-23页 |
| 2.2.1 水稻材料RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第22页 |
| 2.2.3 Xrg1基因干涉片段扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化和回收 | 第23页 |
| 2.3 水稻Xrg1基因RNAi表达载体的构建及检测 | 第23-26页 |
| 2.3.1 水稻Xrg1基因干涉片段与中间载体的连接 | 第23-24页 |
| 2.3.2 大肠杆菌菌株Transblue感受态的制备 | 第24-25页 |
| 2.3.3 大肠杆菌转化 | 第25页 |
| 2.3.4 阳性克隆的筛选和鉴定 | 第25页 |
| 2.3.5 质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.6 DNA测序及核苷酸序列分析 | 第26页 |
| 2.3.7 干涉载体pANDA-Xrg1-RNAi的构建及检测 | 第26页 |
| 2.4 农杆菌介导水稻Xrg1基因RNAi表达载体的转化 | 第26-28页 |
| 2.4.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 2.4.2 重组质粒对农杆菌的转化 | 第27页 |
| 2.4.3 工程农杆菌的鉴定 | 第27页 |
| 2.4.4 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第27-28页 |
| 2.5 转基因植株的分子生物学检测 | 第28页 |
| 2.6 转基因植株表型分析 | 第28-29页 |
| 2.7 亚细胞定位实验 | 第29页 |
| 2.8 酵母双杂交检测XRG1与XA21相互作用 | 第29-32页 |
| 2.8.1 XRG1以及XA21酵母系统重组载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.8.2 酵母菌株Y2H GOLD感受态制备 | 第30页 |
| 2.8.3 酵母感受态细胞转化 | 第30-31页 |
| 2.8.4 Bait质粒自激活和毒性检测 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-46页 |
| 1 水稻受白叶枯病原菌诱导表达上调基因Xrg1的鉴定 | 第32-34页 |
| 1.1 筛选受白叶枯菌诱导的基因Xrg1 | 第32页 |
| 1.2 Xrg1基因序列及蛋白结构分析 | 第32-34页 |
| 1.2.1 Xrg1基因序列分析 | 第32-33页 |
| 1.2.2 XRG1蛋白结构分析 | 第33-34页 |
| 1.2.3 Xrg1聚类分析 | 第34页 |
| 2 Xrg1在不同时期各个组织器官中的表达量 | 第34-35页 |
| 3 XRG1的水稻原生质体亚细胞定位 | 第35-36页 |
| 4 水稻Xrg1基因RNAi载体的构建 | 第36-39页 |
| 4.1 RNA提取和检测 | 第36页 |
| 4.2 Xrg1基因RNAi干涉片段扩增及克隆 | 第36-37页 |
| 4.3 pCR8-Xrg1Ri与干涉表达载体pANDA重组并转入农杆菌 | 第37-39页 |
| 5 农杆菌介导的Xrg1 RNAi干涉植株的获得 | 第39-41页 |
| 5.1 农杆菌介导的转基因转化体系 | 第39页 |
| 5.2 T_0代转基因植株阳性检测 | 第39-40页 |
| 5.3 T_3代转基因纯合植株筛选获得 | 第40-41页 |
| 6 Xrg1参与Xa21介导的抗病反应的相关研究 | 第41-44页 |
| 6.1 T_0代白叶枯抗病性检测 | 第41页 |
| 6.2 T_1代白叶枯抗病性共分离检测 | 第41-42页 |
| 6.3 T_3代转基因纯合株系RNA干涉程度鉴定 | 第42-43页 |
| 6.4 接白叶枯菌观察表型并统计细菌生长量 | 第43-44页 |
| 7 XRG1与XA21相互作用机制研究 | 第44-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-49页 |
| 1、Xrg1编码一个脯氨酸羟化酶,表达受白叶枯诱导 | 第46-47页 |
| 2、Xrg1参与Xa21介导的白叶枯抗病反应 | 第47页 |
| 3、后期分析与展望 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
