| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-12页 |
| 第一章 | 第12-30页 |
| ·主要实验材料 | 第12-14页 |
| ·主要试剂 | 第12页 |
| ·主要仪器 | 第12-13页 |
| ·主要配制试剂 | 第13-14页 |
| ·构建针对KIR2DL3基因的shRNA及慢病毒载体 | 第14-20页 |
| ·shRNA构建及退火 | 第14-16页 |
| ·shRNA慢病毒载体PLKO.1质粒扩增及双酶切 | 第16-17页 |
| ·PLKO.1双酶切产物回收 | 第17-18页 |
| ·shRNA连接至酶切后PLKO.1载体 | 第18-20页 |
| ·PLKO.1-shRNA重组质粒酶切鉴定 | 第20页 |
| ·包装针对KIR2DL3基因的慢病毒 | 第20-21页 |
| ·PLKO.1-shRNA、PSPAX2、PMD2G与293T细胞转染 | 第20-21页 |
| ·收集慢病毒颗粒 | 第21页 |
| ·shRNA沉默NK细胞的KIR2DL3基因 | 第21-23页 |
| ·NK细胞分离 | 第21页 |
| ·慢病毒感染KIR2DL3阳性NK细胞 | 第21-22页 |
| ·Western-blot检测NK细胞KIR2DL3蛋白表达 | 第22-23页 |
| ·结果 | 第23-27页 |
| ·构建PLKO.1-shRNA重组质粒 | 第23-25页 |
| ·shRNA沉默NK细胞的KIR2DL3基因 | 第25-27页 |
| ·讨论 | 第27-30页 |
| 第二章 | 第30-44页 |
| ·主要实验材料 | 第30-32页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·主要配制试剂 | 第31-32页 |
| ·建立体外感染HCV的CD4+T细胞模型 | 第32-35页 |
| ·JFH-1质粒酶切及产物回收 | 第32-33页 |
| ·HCV-RNA转录及纯化 | 第33页 |
| ·HCV-RNA转染 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR检测Huh7.5.1细胞及上清中HCV-RNA | 第34-35页 |
| ·分选CD4+T细胞 | 第35页 |
| ·HCV病毒颗粒感染CD4+T细胞 | 第35页 |
| ·沉默KIR2DL3的NK细胞体外抑制HCV-CD4+T细胞复制活性研究 | 第35-38页 |
| ·受试者选择 | 第35-36页 |
| ·受试者NK细胞提取 | 第36页 |
| ·受试者CD4+T细胞提取 | 第36页 |
| ·NK细胞及CD4+T细胞处理 | 第36页 |
| ·沉默KIR2DL3基因的NK细胞与HCV-CD4+T细胞孵育 | 第36-37页 |
| ·RT-qPCR检测各组HCV-RNA | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·建立体外感染HCV的CD4+T细胞模型 | 第38-40页 |
| ·沉默KIR2DL3基因NK细胞抑制HCV-CD4+T复制活性研究 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 问题与展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 附录 | 第55-67页 |
| 附录一：技术路线图 | 第55-56页 |
| 附录二：综述 | 第56-66页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录三：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果 | 第66-67页 |
