| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 绪论 | 第12-19页 |
| 第一章 基于水溶性富勒烯的光响应性阳离子核酸载体的制备及其在siRNA递送中的应用研究 | 第19-54页 |
| 一 实验材料 | 第20-22页 |
| 1 试剂与药品 | 第20-21页 |
| 2 实验仪器 | 第21页 |
| 3 细胞 | 第21页 |
| 4 实验动物 | 第21-22页 |
| 二 实验方法 | 第22-29页 |
| (一) C60-Dex-NH2载体的制备及材料学表征 | 第22-25页 |
| 1 末端氨基化葡聚糖的制备及表征 | 第22-23页 |
| ·末端氨基化葡聚糖的制备 | 第22页 |
| ·TNBS法测定葡聚糖末端氨基转化率 | 第22页 |
| ·DNS法测定葡聚糖还原末端含量 | 第22-23页 |
| 2 水溶性富勒烯(C60-Dex)的制备及表征 | 第23-24页 |
| ·混合溶剂配比的确定 | 第23页 |
| ·C60-Dex的制备 | 第23页 |
| ·SSNMR检测C60-Dex分子结构 | 第23-24页 |
| ·GPC检测C60-Dex分子量 | 第24页 |
| 3 阳离子化葡聚糖修饰富勒烯(C60-Dex-NH2)的制备及表征 | 第24-25页 |
| ·C60-Dex-NH2的制备 | 第24页 |
| ·葡聚糖侧链乙二胺导入率的测定 | 第24页 |
| ·分光光度计检测C60-Dex-NH2的吸光度 | 第24页 |
| ·细胞色素C检测光照条件下ROS释放情况 | 第24-25页 |
| (二) C60-Dex-NH2/siRNA复合物的理化学表征 | 第25页 |
| 1 琼脂糖凝胶电泳检测C60-Dex-NH2与siRNA结合能力 | 第25页 |
| 2 DLS检测C60-Dex-NH2/siRNA复合物的粒径 | 第25页 |
| 3 ELS检测C60-Dex-NH2/siRNA复合物的Zeta电位 | 第25页 |
| 4 C60-Dex-NH2/siRNA复合物在光照条件下的稳定性 | 第25页 |
| (三) 细胞培养 | 第25-26页 |
| 1 MDA-MB-231细胞培养 | 第25-26页 |
| 2 MDA-MB-231-EGFP细胞培养 | 第26页 |
| 3 4T1-GFP-Luc2细胞培养 | 第26页 |
| (四) MDA-MB-231细胞对C60-Dex-NH2/siRNA复合物的内吞及其胞内定位 | 第26-27页 |
| 1 N/P与光照对细胞吞噬能力的影响 | 第26页 |
| 2 不同孵育时间对细胞吞噬能力的影响 | 第26页 |
| 3 Confocal观察C60-Dex-NH2/siRNA复合物在MDA-MB-231细胞中的定位 | 第26-27页 |
| (五) cck-8检测C60-Dex-NH2/siRNA复合物的细胞毒性 | 第27页 |
| 1 不同N/P对细胞毒性的影响 | 第27页 |
| 2 不同光照时间对细胞毒性的影响 | 第27页 |
| (六) C60-Dex-NH2/EGFP siRNA复合物对MDA-MB-231-EGFP细胞的干扰效率 | 第27-28页 |
| 1 光照对干扰效率的影响 | 第27页 |
| 2 10%血清对干扰效率的影响 | 第27-28页 |
| 3 光照时间对干扰效率的影响 | 第28页 |
| 4 荧光显微镜观察光照对干扰效率的影响 | 第28页 |
| (七) C60-Dex-NH2/EGFP siRNA复合物的体内干扰效率 | 第28-29页 |
| 1 建立4T1-GFP-LUC2荷瘤小鼠模型 | 第28页 |
| 2 瘤内给药及光照处理 | 第28页 |
| 3 活体成像系统原位检测肿瘤GFP与Luciferase的平均荧光强度 | 第28-29页 |
| 4 肿瘤组织匀浆中GFP与Luciferase平均荧光强度的检测 | 第29页 |
| (八) 统计分析 | 第29页 |
| 三 实验结果 | 第29-47页 |
| (一) C60-Dex-NH2载体的材料学表征 | 第29-36页 |
| 1 末端氨基化葡聚糖的制备及表征 | 第29-32页 |
| ·TNBS法测定葡聚糖末端氨基转化率 | 第29-31页 |
| ·TNBS标准曲线的绘制 | 第29-30页 |
| ·不同反应温度下产物末端氨基转化率 | 第30-31页 |
| ·DNS法测定葡聚糖还原末端含量 | 第31-32页 |
| ·TNBS标准曲线的绘制 | 第31页 |
| ·不同反应温度下产物还原末端含量 | 第31-32页 |
| 2 水溶性富勒烯(C60-Dex)的制备及表征 | 第32-34页 |
| ·混合溶剂配比的确定 | 第32页 |
| ·SSNMR检测C60-Dex分子结构 | 第32-33页 |
| ·GPC检测C60-Dex分子量 | 第33-34页 |
| ·仪器校准 | 第33-34页 |
| ·C60-Dex分子量测定 | 第34页 |
| 3 阳离子化葡聚糖修饰富勒烯(C60-Dex-NH2)的制备及表征 | 第34-36页 |
| ·葡聚糖侧链乙二胺导入率的测定 | 第34-35页 |
| ·C60-Dex-NH2的吸收光谱 | 第35-36页 |
| ·吸收光谱的测定 | 第35页 |
| ·特征吸收峰吸光值与C60含量的关系 | 第35-36页 |
| ·C60-Dex-NH2在光照条件下ROS释放情况 | 第36页 |
| (二) C60-Dex-NH2/siRNA复合物的理化学表征 | 第36-38页 |
| 1 C60-Dex-NH2与siRNA结合能力 | 第36-37页 |
| 2 C60-Dex-NH2/siRNA复合物的粒径(N/P=20) | 第37页 |
| 3 C60-Dex-NH2/siRNA复合物的Zeta电位(N/P=20) | 第37-38页 |
| 4 C60-Dex-NH2/siRNA复合物的稳定性 | 第38页 |
| (三) MDA-MB-231细胞对C60-Dex-NH2/siRNA复合物的内吞及其胞内定位 | 第38-41页 |
| 1 N/P与光照对细胞吞噬能力的影响 | 第38-40页 |
| ·不同N/P与光照对阳性率的影响 | 第38-39页 |
| ·不同N/P与光照对平均荧光强度的影响 | 第39-40页 |
| 2 不同孵育时间对细胞吞噬能力的影响 | 第40-41页 |
| ·不同孵育时间对阳性率的影响 | 第40页 |
| ·不同孵育时间对平均荧光强度的影响 | 第40-41页 |
| 3 Confocal观察C60-Dex-NH2/siRNA复合物在MDA-MB-231细胞中的定位 | 第41页 |
| (四) C60-Dex-NH2/siRNA复合物对MDA-MB-231细胞的细胞毒性 | 第41-43页 |
| 1 N/P对细胞活性的影响 | 第41-42页 |
| 2 光照时间对细胞活性的影响 | 第42-43页 |
| (五) C60-Dex-NH2/EGFP siRNA复合物对MDA-MB-231-EGFP细胞的干扰效率 | 第43-45页 |
| 1 流式细胞术检测光照对干扰效率的影响 | 第43-44页 |
| 2 血清对干扰效率的影响 | 第44页 |
| 3 光照时间对干扰效率的影响 | 第44-45页 |
| 4 荧光显微镜观察光照对干扰效率的影响 | 第45页 |
| (六) C60-Dex-NH2/EGFP siRNA复合物的体内干扰效率 | 第45-47页 |
| 1 干扰效率计算方法的建立 | 第45-46页 |
| 2 活体成像系统原位检测肿瘤GFP与Luciferase的平均荧光强度 | 第46-47页 |
| 3 肿瘤组织匀浆中GFP与Luciferase平均荧光强度的检测 | 第47页 |
| 四 讨论 | 第47-54页 |
| 第二章 利用功能化高分子包覆提高有血清环境下阳离子siRNA载体干扰效率的研究 | 第54-64页 |
| 一 实验材料 | 第55-56页 |
| 1 试剂与药品 | 第55-56页 |
| 2 实验仪器 | 第56页 |
| 3 细胞系 | 第56页 |
| 二 实验方法 | 第56-58页 |
| 1 羧基化葡聚糖(Dex-OOOH)的制备 | 第56页 |
| 2 羧基化葡聚糖修饰富勒烯(C60-Dex-COOH)的制备 | 第56页 |
| 3 利用静电自组装制备阴离子包覆的PS/siRNA复合物 | 第56页 |
| 4 复合物粒径及表面电位的检测 | 第56-57页 |
| 5 石英晶体微天平(QCM)方法检测阴离子化高分子包覆层的形成及蛋白吸附 | 第57页 |
| ·准备表面为PS层的QCM芯片 | 第57页 |
| ·BSA吸附量的测量 | 第57页 |
| 6 流式细胞分析术检测细胞对复合物的摄取 | 第57页 |
| 7 PS/siRNA复合物处理后细胞活性的检测 | 第57-58页 |
| 8 流式细胞术检测复合物干扰效率 | 第58页 |
| 9 统计分析 | 第58页 |
| 三 实验结果 | 第58-62页 |
| 1 阴离子包覆的PS/siRNA复合体的制备及表征 | 第58-59页 |
| 2 阴离子包覆对PS表面蛋白吸附的影响 | 第59页 |
| 3 阴离子包覆量对细胞内吞的影响 | 第59-61页 |
| 4 阴离子包覆量对PS/siRNA复合体细胞毒性的影响 | 第61页 |
| 5 流式细胞术检测复合物干扰效率 | 第61-62页 |
| 四 讨论 | 第62-64页 |
| 总结与展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 附录：中英文略语表 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第70-71页 |
