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布氏锥虫转录延伸因子TFIIS和PAF1复合体的结构与功能研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
第一章 研究背景介绍第13-51页
   ·布氏锥虫简介第13-15页
   ·布氏锥虫基因组第15-17页
     ·布氏锥虫核基因组第15-17页
     ·布氏锥虫线粒体基因组第17页
   ·布氏锥虫转录第17-18页
   ·布氏锥虫RNA聚合酶第18-22页
     ·RNA聚合酶Ⅰ第19-21页
     ·RNA聚合酶Ⅱ第21页
     ·RNA聚合酶Ⅲ第21-22页
   ·布氏锥虫启动子区域第22-26页
     ·RNA聚合酶Ⅰ的转录起始第22-24页
     ·RNA聚合酶Ⅱ的转录起始第24-25页
     ·RNA聚合酶Ⅲ的转录起始第25-26页
   ·布氏锥虫其他转录因子第26-38页
     ·TFIIH第26-27页
     ·TFIID第27页
     ·SNAPc第27-28页
     ·TFIIA和TFIIB第28页
     ·TFIIS第28-31页
     ·PAF1复合体第31-38页
   ·布氏锥虫组蛋白修饰及其在转录过程中的作用第38-44页
     ·布氏锥虫组蛋白修饰相关蛋白第38-41页
     ·布氏锥虫组蛋白修饰第41-43页
     ·布氏锥虫PWWP结构域第43-44页
   ·布氏锥虫VSG的表达及调控第44-51页
第二章 实验材料与方法第51-73页
   ·布氏锥虫TFIIS PWWP结构域蛋白的克隆、表达和纯化第51-54页
     ·布氏锥虫TFIIS PWWP及TFIIS2-2 LW结构域蛋白的克隆第51页
     ·布氏锥虫TFIIS2-2 PWWP结构域蛋白点突变表达质粒的构建第51-52页
     ·布氏锥虫TFIIS PWWP结构域蛋白的表达及纯化第52-54页
   ·布氏锥虫TFIIS PWWP结构域的核磁谱图采集及结构计算第54页
   ·小肽和DNA的合成与纯化第54-55页
   ·NMR化学位移微扰实验第55-56页
   ·等温滴定微量热(ITC)第56-57页
   ·荧光偏振(FP)第57-58页
   ·布氏锥虫细胞培养及相关细胞系构建第58-62页
     ·干扰细胞系构建、RNA干扰及细胞计数第59-61页
     ·过表达细胞系构建第61-62页
     ·原位表达细胞系构建第62页
   ·GST pull down第62-63页
   ·免疫印迹第63-64页
   ·酵母双杂交第64-66页
     ·酵母双杂交相关载体构建第64-65页
     ·酵母转化第65-66页
   ·串联亲和纯化第66-67页
   ·实时荧光定量PCR第67-70页
     ·RNA抽提第67-68页
     ·反转录反应第68页
     ·实时荧光定量PCR反应第68-70页
   ·转录组测序第70-73页
第三章 实验结果与讨论第73-115页
   ·布氏锥虫转录延伸因子TFIIS PWWP结构域结构与分子作用机制第73-95页
     ·TFIIS2-1 PWWP、TFIIS2-2 PWWP和TFIIS2-2 LW结构域的氨基酸归属第73-76页
     ·TFIIS2-1 PWWP结构域的溶液结构及其与其他PWWP结构域结构的比较第76-80页
     ·TFIIS2-2 PWWP结构域的溶液结构及其与其他PWWP结构域结构的比较第80-83页
     ·TFIIS2-1 PWWP和TFIIS2-2 PWWP结构域与DNA的结合第83-85页
     ·TFIIS2-1 PWWP和TFIIS2-2 PWWP结构域与甲基化组蛋白的结合第85-89页
     ·TFIIS2-2 PWWP结构域特异性结合H4K17me3和H3K32me3第89-94页
     ·TFIIS2-2 PWWP结构域结合RNA结合蛋白NRBD1第94-95页
   ·TFIIS2-1和TFIIS2-2对细胞的生长是必须的第95-96页
   ·TFIIS2-1和TFIIS2-2通过LW结构域结合PAFl复合体中的LE01亚基第96-98页
   ·布氏锥虫中存在完整的PAF1复合体第98-102页
   ·布氏锥虫PAF1复合体各个亚基的相互作用网络第102-106页
   ·布氏锥虫PAF1复合体对细胞生长是必须的第106-107页
   ·布氏锥虫PAF1复合体参与VSG ES沉默的调控第107-111页
   ·布氏锥虫PAF1复合体通过ISWI调控VSG ES沉默第111-113页
   ·总结第113-115页
参考文献第115-137页
附录第137-193页
致谢第193-195页
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果第195页

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