| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| ·伪狂犬病毒 | 第10-15页 |
| ·伪狂犬病毒的分子生物学及危害 | 第10-11页 |
| ·伪狂犬病毒疫苗 | 第11-14页 |
| ·目前伪狂犬病毒在我国流行趋势 | 第14-15页 |
| ·CRISPR/Cas9基因编辑系统 | 第15-17页 |
| ·CRISPR的发现和Cas家族的分型 | 第15-16页 |
| ·CRISPR/Cas9系统的原理和应用 | 第16-17页 |
| ·Cre/lox重组系统的特性及应用 | 第17-19页 |
| 第二章 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第三章 材料和方法 | 第20-34页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·病毒和细胞 | 第20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·主要酶和试剂 | 第20页 |
| ·载体与质粒 | 第20-21页 |
| ·培养基与抗生素及其制备 | 第21页 |
| ·主要缓冲液、试剂及其制备 | 第21页 |
| ·感受态细胞制备试剂 | 第21-22页 |
| ·低熔点琼脂糖噬斑实验试剂制备 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-34页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第22页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第22页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第22-23页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第23页 |
| ·转化连接产物或质粒载体 | 第23-24页 |
| ·质粒载体的构建和鉴定 | 第24-29页 |
| ·guide RNA的设计和表达载体构建和鉴定 | 第24-25页 |
| ·体外扩增伪狂犬病毒gE和TK基因上下游同源臂 | 第25-29页 |
| ·碱裂解法小量抽提质粒 | 第29页 |
| ·微量中和试验（固定病毒-稀释血清法） | 第29-30页 |
| ·引物的设计合成 | 第30-31页 |
| ·PRN-HNX重组毒的鉴定 | 第31页 |
| ·细胞培养 | 第31页 |
| ·细胞PEI转染 | 第31页 |
| ·低熔点琼脂糖挑斑纯化 | 第31-32页 |
| ·病毒的增殖、收获和保存 | 第32页 |
| ·病毒基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| ·测定病毒半数组织感染量（TCID50） | 第33页 |
| ·小鼠动物实验 | 第33页 |
| ·仔猪动物实验 | 第33-34页 |
| 第四章 结果与分析 | 第34-50页 |
| ·质粒载体的构建和鉴定 | 第34-36页 |
| ·guide RNA的设计和表达载体构建和鉴定 | 第34-35页 |
| ·TK、gE基因重组同源臂构建 | 第35-36页 |
| ·利用CRISPR/Cas9系统构建PRV-ΔTK-ΔgE-mCherry-GFP重组毒 | 第36-37页 |
| ·PRV-HNX-ΔTK-ΔgE-mCherry-GFP重组毒的纯化 | 第37-38页 |
| ·PRV-HNX-ΔTK-ΔgE-mCherry-GFP重组毒的单细胞流式分选纯化 | 第37-38页 |
| ·PRV-HNX-ΔTK-ΔgE-mCherry-GFP重组病毒的低熔点琼脂糖噬斑纯化 | 第38页 |
| ·PRV-HNX-ΔTK-ΔgE-mCherry-GFP重组病毒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·利用Cre/lox系统敲除PRV-HNX-ΔTK-ΔgE-mCherry-GFP荧光基因 | 第39-40页 |
| ·PRV-HNX-ΔTK-ΔgE的纯化和鉴定 | 第40-41页 |
| ·小鼠动物实验 | 第41-43页 |
| ·小鼠攻毒实验 | 第41-42页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第42-43页 |
| ·仔猪动物实验 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-50页 |
| ·sgRNA的设计 | 第45页 |
| ·同源重组片段的设计、扩增和融合 | 第45-46页 |
| ·细胞转染和病毒感染条件的摸索 | 第46页 |
| ·伪狂犬病毒TK基因抑制剂BVDU的使用 | 第46页 |
| ·单细胞流式分选在重组病毒分选中的应用 | 第46-47页 |
| ·CRISPR/Cas9编辑病毒基因组 | 第47页 |
| ·病毒传染性疾病的防治和病毒的变异进化 | 第47-48页 |
| ·CRISPR/Cas9和Cre/lox基因编辑系统在疫苗制备中的潜力 | 第48页 |
| ·PRV基因缺失毒株的应用 | 第48-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
