| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-23页 |
| ·海藻糖的研究现状 | 第13-15页 |
| ·海藻糖的结构与来源 | 第13页 |
| ·海藻糖的生产方法 | 第13-14页 |
| ·海藻糖的应用 | 第14-15页 |
| ·β-淀粉酶的研究现状 | 第15-16页 |
| ·β-淀粉酶的来源 | 第15页 |
| ·β-淀粉酶的作用机理 | 第15-16页 |
| ·β-淀粉酶的应用 | 第16页 |
| ·海藻糖合酶的研究现状 | 第16-19页 |
| ·海藻糖合酶的来源 | 第16-17页 |
| ·海藻糖合酶的作用机理 | 第17-18页 |
| ·海藻糖合酶基因工程研究进展 | 第18-19页 |
| ·融合蛋白技术的研究现状 | 第19-21页 |
| ·融合酶简介 | 第19页 |
| ·蛋白融合技术 | 第19-21页 |
| ·研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第2章 蜡状芽孢杆菌β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第23-37页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·分子生物学试剂 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·试剂的配制方法 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·蜡状芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·质粒pET-28a的提取 | 第26页 |
| ·表达引物的设计 | 第26页 |
| ·β-淀粉酶基因的克隆与转化 | 第26-27页 |
| ·阳性重组子的检测 | 第27-28页 |
| ·阳性重组子的诱导表达与酶活检测 | 第28-29页 |
| ·实验结果与讨论 | 第29-34页 |
| ·质粒pET-28a的提取 | 第30页 |
| ·β-淀粉酶基因的克隆 | 第30页 |
| ·阳性重组子菌落PCR | 第30-31页 |
| ·重组质粒酶切 | 第31页 |
| ·β-淀粉酶基因的测序分析 | 第31-34页 |
| ·阳性重组子的诱导表达与酶活力测定 | 第34页 |
| ·本章小结 | 第34-37页 |
| 第3章 恶臭假单胞菌海藻糖合酶在大肠杆菌中的表达 | 第37-47页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌种和质粒 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·试剂的配制方法 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-39页 |
| ·恶臭假单胞菌基因组DNA的提取 | 第38页 |
| ·载体pET-28a的提取 | 第38页 |
| ·引物的设计 | 第38页 |
| ·海藻糖合酶基因的克隆与转化 | 第38页 |
| ·海藻糖合酶阳性重组子的检测 | 第38-39页 |
| ·阳性重组子的诱导表达与酶活检测 | 第39页 |
| ·实验结果与讨论 | 第39-45页 |
| ·海藻糖合酶基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·阳性重组子菌落PCR | 第41页 |
| ·重组质粒的酶切 | 第41-42页 |
| ·海藻糖合酶基因的测序与分析 | 第42-44页 |
| ·阳性重组子的诱导表达与酶活力测定 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 第4章 β-淀粉酶-海藻糖合酶融合酶基因的构建与表达 | 第47-65页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·融合酶构建的简介 | 第47页 |
| ·表达宿主菌和表达质粒的选择 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌种和质粒 | 第47-48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·试剂的配制方法 | 第48页 |
| ·试验方法 | 第48-52页 |
| ·连接肽的选择 | 第48-49页 |
| ·引物的设计 | 第49-50页 |
| ·重组质粒pET-28a-ba和pET-28a-ts的提取 | 第50页 |
| ·目的基因的PCR与产物纯化 | 第50-51页 |
| ·目的基因的转化及检测 | 第51-52页 |
| ·菌株E.coli BL21(pET-28a-baplts)的诱导表达与酶活检测 | 第52页 |
| ·实验结果与讨论 | 第52-63页 |
| ·融合酶重组质粒的构建过程 | 第52-53页 |
| ·缺失终止密码子的ba基因重组质粒的构建 | 第53-55页 |
| ·重组质粒pET-28a-baplts的构建 | 第55-58页 |
| ·融合酶的表达与催化 | 第58-61页 |
| ·融合酶酶蛋白结构分析 | 第61-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 第5章 融合酶工程菌诱导表达培养基的单因素优化 | 第65-77页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·菌种 | 第65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65-66页 |
| ·培养基 | 第66页 |
| ·试剂的配制方法 | 第66页 |
| ·试验方法 | 第66-68页 |
| ·融合酶重组菌的生长曲线 | 第66页 |
| ·融合酶重组菌遗传稳定性检测 | 第66页 |
| ·硫酸镁浓度对融合酶的影响 | 第66-67页 |
| ·Na_2HPO_4浓度对融合酶的影响 | 第67页 |
| ·KH_2PO_4浓度对融合酶的影响 | 第67页 |
| ·NaCl浓度对融合酶的影响 | 第67页 |
| ·酵母浸粉浓度对融合酶的影响 | 第67页 |
| ·蛋白胨浓度对融合酶的影响 | 第67页 |
| ·(NH)_2SO_4对融合酶的影响 | 第67页 |
| ·甘油浓度对融合酶的影响 | 第67页 |
| ·优化培养基对工程菌产酶活力的影响 | 第67-68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-75页 |
| ·融合酶重组菌生长曲线 | 第68页 |
| ·融合酶重组菌遗传稳定性检测 | 第68-69页 |
| ·MgSO_4浓度对融合酶的影响 | 第69-70页 |
| ·磷酸盐对融合酶的影响 | 第70页 |
| ·NaCl浓度对融合酶的影响 | 第70-71页 |
| ·酵母浸粉浓度对融合酶的影响 | 第71-72页 |
| ·蛋白胨浓度对融合酶的影响 | 第72页 |
| ·(NH_4)_2SO_4对融合酶的影响 | 第72-73页 |
| ·甘油浓度对融合酶的影响 | 第73-74页 |
| ·优化培养基对工程菌产酶活力的影响 | 第74-75页 |
| ·本章小结 | 第75-77页 |
| 第6章 结论与展望 | 第77-79页 |
| ·结论 | 第77-78页 |
| ·展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 在学期间主要研究成果 | 第89页 |
