| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 鸡杆菌概述 | 第12-18页 |
| ·鸡杆菌分类地位的确立 | 第12-13页 |
| ·流行病学研究 | 第13-14页 |
| ·鸡杆菌的地域分布与宿主相关性 | 第13-14页 |
| ·鸡杆菌的传播途径与感染日龄 | 第14页 |
| ·致病性研究 | 第14-15页 |
| ·致病机理及毒力因子 | 第15-18页 |
| ·溶血素 | 第15-16页 |
| ·荚膜多糖 | 第16页 |
| ·黏附素 | 第16-17页 |
| ·金属蛋白酶 | 第17页 |
| ·耐药因子 | 第17-18页 |
| ·外膜囊泡通道 | 第18页 |
| ·鸡杆菌抗原表位的预测 | 第18页 |
| 2 鸡杆菌的诊断方法研究进展 | 第18-21页 |
| ·分子生物学检测 | 第18-20页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第18-19页 |
| ·基因组测序分析 | 第19页 |
| ·基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS） | 第19-20页 |
| ·荧光原位杂交（FISH） | 第20页 |
| ·血清学检测 | 第20-21页 |
| ·玻片凝集试验 | 第20页 |
| ·乳胶凝集试验 | 第20-21页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第21页 |
| 3 小结 | 第21-24页 |
| 试验一 鸭源鸡杆菌对小鼠的致病性试验 | 第24-30页 |
| 引言 | 第24页 |
| 1 材料与方法 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·鸭源鸡杆菌菌株 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24-25页 |
| ·生长曲线的测定 | 第25页 |
| ·动物致病性试验 | 第25页 |
| ·LD50的测定 | 第25页 |
| ·小鼠致病性试验 | 第25页 |
| ·PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·PCR 产物测序 | 第25页 |
| ·病理组织学观察 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-28页 |
| ·生长曲线的测定 | 第25-26页 |
| ·小鼠致病性试验及 LD50的测定 | 第26-27页 |
| ·病理学观察 | 第27-28页 |
| ·病理剖检 | 第27-28页 |
| ·病理组织切片 | 第28页 |
| 3 结论与讨论 | 第28-30页 |
| ·鸭源鸡杆菌的致病性研究 | 第28页 |
| ·鸭源鸡杆菌对小鼠的致病性 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 试验二 鸭源鸡杆菌 GtxA 蛋白的体外表达及其对鸡外周血淋巴细胞的毒性作用 | 第30-38页 |
| 引言 | 第30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-32页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·GtxA 毒素蛋白的体外表达 | 第31页 |
| ·GtxA 重组表达载体的构建 | 第31页 |
| ·重组 GtxA 毒素蛋白的原核表达 | 第31页 |
| ·蛋白活性的鉴定 | 第31页 |
| ·鸡外周血淋巴细胞的分离与培养 | 第31-32页 |
| ·GtxA 表达产物对外周血淋巴细胞的毒性试验 | 第32页 |
| ·外周血淋巴细胞分泌细胞因子的测定 | 第32页 |
| ·数据处理 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-35页 |
| ·GtxA 重组表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·GtxA 毒素蛋白的体外表达 | 第33-34页 |
| ·GtxA 不同结构域对外周血淋巴细胞的毒性试验 | 第34页 |
| ·外周血淋巴细胞分泌细胞因子的测定 | 第34-35页 |
| 3 讨论与结论 | 第35-38页 |
| 试验三 抗鸭源鸡杆菌 GtxA 蛋白抗体间接 ELISA 方法的建立及初步应用 | 第38-50页 |
| 引言 | 第38页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·阳性血清的制备 | 第38页 |
| ·PCR 引物设计 | 第38-39页 |
| ·基因组的提取与 gtxA 基因的扩增、克隆及序列分析 | 第39页 |
| ·pGEX-6P-1-galli 重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的原核表达 | 第40页 |
| ·融合蛋白表达条件的优化 | 第40页 |
| ·目的蛋白纯化及 Western-blotting 检测 | 第40页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·Western-blotting 检测 | 第40页 |
| ·间接 ELISA 方法的建立 | 第40-41页 |
| ·抗原包被浓度和待检血清稀释度的确定 | 第40页 |
| ·抗原包被时间和温度的确定 | 第40页 |
| ·封闭液和封闭时间的确定 | 第40页 |
| ·酶标二抗工作浓度的确定 | 第40-41页 |
| ·临界值的确定 | 第41页 |
| ·重复性试验 | 第41页 |
| ·特异性试验 | 第41页 |
| ·间接 ELISA 方法的初步应用 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-46页 |
| ·鸭源鸡杆菌 gtxA 基因全长的扩增 | 第41页 |
| ·gtxA 基因抗原位点预测分析 | 第41-42页 |
| ·重组质粒 pGEX-6P-1-galli 的鉴定 | 第42-43页 |
| ·表达产物的检测分析 | 第43-44页 |
| ·间接 ELISA 方法最佳工作条件的确定 | 第44-45页 |
| ·抗原包被及一抗待检血清最佳工作浓度的确定 | 第44页 |
| ·抗原包被时间和温度的确定 | 第44页 |
| ·封闭液和封闭时间的确定 | 第44页 |
| ·酶标二抗工作浓度的确定 | 第44页 |
| ·临界值的确定 | 第44页 |
| ·特异性试验 | 第44-45页 |
| ·重复性试验 | 第45页 |
| ·间接 ELISA 方法的初步应用 | 第45-46页 |
| 3 结论与讨论 | 第46-50页 |
| ·鸭源鸡杆菌的致病性与鉴定 | 第46-47页 |
| ·鸭源鸡杆菌的血清型 | 第47页 |
| ·小结 | 第47-50页 |
| 全文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| ABSTRACT | 第57-60页 |
| 附录 | 第60页 |
