| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-28页 |
| 1 红曲霉 | 第16-17页 |
| ·红曲与红曲霉 | 第16页 |
| ·红曲的应用 | 第16-17页 |
| 2 GABA | 第17-20页 |
| ·GABA的理化性质 | 第17-18页 |
| ·GABA的生理功能 | 第18-19页 |
| ·真菌中GABA的代谢途径 | 第19-20页 |
| 3 GAD | 第20-23页 |
| ·GAD的结构与性质 | 第20-21页 |
| ·GAD的分布与功能 | 第21-22页 |
| ·GAD的基因克隆与表达 | 第22-23页 |
| 4 GABA-T | 第23-24页 |
| ·GABA-T的生理功能 | 第23页 |
| ·GABA-T的抑制剂 | 第23-24页 |
| 5 生物信息学 | 第24-26页 |
| ·生物信息学简介 | 第24页 |
| ·生物信息学的发展阶段 | 第24-25页 |
| ·生物信息学的研究领域和研究方法 | 第25-26页 |
| 6 立题背景及主要研究内容 | 第26-28页 |
| ·立题背景 | 第26页 |
| ·主要研究内容 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 红曲霉GAD基因的克隆 | 第28-46页 |
| 1 材料与仪器 | 第28-29页 |
| ·菌株与与培养基 | 第28页 |
| ·酶与试剂盒 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-39页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的合成 | 第29-31页 |
| ·GAD基因中间片段的克隆 | 第31-34页 |
| ·RACE法克隆GAD基因的末端序列 | 第34-39页 |
| ·红曲霉GAD全长序列 | 第39页 |
| 3 实验结果与分析 | 第39-44页 |
| ·红色红曲霉菌落及总RNA | 第39-40页 |
| ·GAD基因中间片段 | 第40-42页 |
| ·GAD基因两端片段 | 第42-43页 |
| ·GAD基因全长cDNA序列 | 第43-44页 |
| 4 结论与讨论 | 第44-46页 |
| ·结论 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 红曲霉GAD基因的生物信息学分析 | 第46-61页 |
| 1 材料与仪器 | 第46页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·主要数据库及软件 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-48页 |
| ·GAD基因序列及氨基酸序列 | 第46页 |
| ·GAD基因的酶切图谱分析 | 第46-47页 |
| ·GAD的保守结构域及活性位点 | 第47页 |
| ·GAD的理化性质 | 第47页 |
| ·GAD的基本信息分析 | 第47页 |
| ·GAD二级结构预测 | 第47页 |
| ·GAD三级结构同源建模 | 第47-48页 |
| ·系统进化树的构建 | 第48页 |
| ·多序列比对 | 第48页 |
| 3 实验结果与分析 | 第48-60页 |
| ·GAD的基因序列 | 第48页 |
| ·GAD基因的酶切图谱分析 | 第48-50页 |
| ·GAD的保守结构域及活性位点 | 第50页 |
| ·GAD的理化性质 | 第50-52页 |
| ·GAD的信息分析 | 第52-55页 |
| ·GAD的二级结构预测分析 | 第55-56页 |
| ·GAD的三级结构建模 | 第56-57页 |
| ·系统进化树的构建 | 第57页 |
| ·多重序列比对 | 第57-60页 |
| 4 结论与讨论 | 第60-61页 |
| ·结论 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| 第四章 红曲霉GABA-T基因的克隆 | 第61-70页 |
| 1 材料与仪器 | 第61页 |
| ·菌株与与培养基 | 第61页 |
| ·酶与试剂盒 | 第61页 |
| ·主要仪器设备 | 第61页 |
| 2 实验方法 | 第61-64页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的合成 | 第61-62页 |
| ·GABA-T基因片段的扩增 | 第62-64页 |
| 3 实验结果与分析 | 第64-69页 |
| ·红色红曲霉的菌落及总RNA | 第64页 |
| ·GABA-T基因的上游片段 | 第64-66页 |
| ·GABA-T基因的下游片段 | 第66-68页 |
| ·GABA-T基因的全长序列 | 第68-69页 |
| 4 结论与讨论 | 第69-70页 |
| ·结论 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 第五章 红曲霉GABA-T基因的生物信息学分析 | 第70-84页 |
| 1 材料与仪器 | 第70页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·主要数据库及软件 | 第70页 |
| 2 实验方法 | 第70-71页 |
| ·GABA-T的基因序列 | 第70页 |
| ·GABA-T的保守结构域及活性位点 | 第70页 |
| ·GABA-T的理化性质 | 第70页 |
| ·GABA-T的基本信息 | 第70页 |
| ·GABA-T二级结构预测 | 第70-71页 |
| ·GABA-T三级结构建模 | 第71页 |
| ·系统进化树的构建 | 第71页 |
| ·多序列比对 | 第71页 |
| 3 实验结果与分析 | 第71-83页 |
| ·GABA-T的基因序列 | 第71-72页 |
| ·GABA-T的酶切图谱分析 | 第72页 |
| ·GABA-T的保守结构域及活性位点 | 第72-75页 |
| ·GABA-T的氨基酸序列的理化性质 | 第75-76页 |
| ·GABA-T的信息分析 | 第76-79页 |
| ·GABA-T的二级结构预测分析 | 第79-80页 |
| ·GABA-T的三级结构建模 | 第80-81页 |
| ·系统进化树的构建 | 第81页 |
| ·多重序列比对 | 第81-83页 |
| 4 结论与讨论 | 第83-84页 |
| ·结论 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-84页 |
| 第六章 GAD和GABA-T基因的相对定量表达分析 | 第84-95页 |
| 1 材料与仪器 | 第84页 |
| ·菌株与与培养基 | 第84页 |
| ·试剂 | 第84页 |
| ·主要仪器与软件 | 第84页 |
| 2 方法 | 第84-86页 |
| ·红曲霉Mr-5的培养 | 第84-85页 |
| ·总RNA提取及cDNA合成 | 第85页 |
| ·定量引物设计及扩增效果检测 | 第85-86页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-94页 |
| ·红色红曲霉Mr-5的菌落形态 | 第86-87页 |
| ·总RNA提取及浓度、纯度检测 | 第87-88页 |
| ·定量引物扩增效果 | 第88页 |
| ·GAD基因表达分析 | 第88-91页 |
| ·GABA-T基因表达分析 | 第91-94页 |
| 4 结论和讨论 | 第94-95页 |
| ·结论 | 第94页 |
| ·讨论 | 第94-95页 |
| 第七章 红曲霉GAD的原核表达及分离纯化 | 第95-103页 |
| 1 材料与仪器 | 第95-96页 |
| 2 方法 | 第96-97页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第96-97页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第97页 |
| ·重组蛋白的大量诱导表达及纯化 | 第97页 |
| 3 结果 | 第97-101页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第97-98页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第98-101页 |
| 4 结论与讨论 | 第101-103页 |
| ·结论 | 第101页 |
| ·讨论 | 第101-103页 |
| 第八章 小结与建议 | 第103-106页 |
| 1 小结 | 第103-104页 |
| 2 建议 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 附录 | 第114-119页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |