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SFTSV全基因组序列及其核衣壳蛋白的原核表达分析

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-10页
縮略词第10-12页
目录第12-14页
第一章 文献综述第14-24页
 1 SFTSV病毒学第14-16页
   ·布尼亚病毒科的分类第14-15页
   ·基因组学及蛋白组学第15页
   ·发病机理第15-16页
 2 流行病学第16-19页
   ·SFTSV在我国的流行概况第16-17页
   ·传播媒介和宿主第17-18页
   ·病毒传播途径第18-19页
 3 诊断方法第19-22页
   ·SFTS临床表现第19页
   ·细胞培养和病毒分离第19-20页
   ·病毒核酸检测第20-21页
   ·病毒血清学检测第21-22页
 4 治疗及预防控制第22-23页
   ·治疗第22页
   ·预防控制第22-23页
 5 本研究的主要研究内容、目的与意义第23-24页
第二章 SFTSV全基因组测序及分子进化分析第24-54页
 1 前言第24页
 2 实验材料第24-26页
   ·细胞及样本第24页
   ·主要试剂和仪器设备第24-26页
 3 实验方法第26-41页
   ·提取病毒RNA第26-27页
   ·荧光定量RT-PCR鉴定第27-28页
   ·细胞培养第28-30页
   ·病毒分离培养第30-31页
   ·SFTSV全基因组序列扩增引物设计第31-41页
   ·基因组核苷酸序列分析比较第41页
 4 结果与分析第41-51页
   ·荧光定量RT-PCR检测结果第41-42页
   ·病毒分离结果第42-43页
   ·全基因组PCR扩增结果第43-44页
   ·测序结果与序列分析第44-45页
   ·SFTSV基于3个片段的分子系统进化树第45-49页
   ·白蛉病毒属基于3个片段分子系统结构树第49-51页
 5 讨论第51-54页
第三章 SFTSV核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达分析第54-75页
 1 前言第54页
 2 实验材料第54-56页
   ·实验毒株、载体及菌株第54页
   ·主要试剂和仪器设备第54-56页
 3 实验方法第56-67页
   ·原核表达载体构建图第56-57页
   ·核衣壳蛋白基因扩增及纯化第57-59页
   ·克隆载体的构建第59-60页
   ·阳性克隆鉴定第60-62页
   ·原核表达载体的构建第62-63页
   ·重组蛋白的诱导表达第63-65页
   ·重组蛋白的大量表达第65-67页
   ·重组蛋白Western blot分析第67页
 4 结果与分析第67-72页
   ·SFTSV核衣壳蛋白基因克隆第67-68页
   ·克隆载体pMD19T-SFTSV-NP构建第68-69页
   ·原核表达载体pET-42a(+)-SFTSV-NP构建第69-70页
   ·重组蛋白的诱导表达与纯化第70-71页
   ·重组蛋白的Western Blot分析第71-72页
 5 讨论第72-75页
参考文献第75-83页
附录第83-86页
 l 抗生素及培养基配制方法第83页
 2 主要实验溶液配制方法第83-86页
致谢第86-88页

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