摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-10页 |
縮略词 | 第10-12页 |
目录 | 第12-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-24页 |
1 SFTSV病毒学 | 第14-16页 |
·布尼亚病毒科的分类 | 第14-15页 |
·基因组学及蛋白组学 | 第15页 |
·发病机理 | 第15-16页 |
2 流行病学 | 第16-19页 |
·SFTSV在我国的流行概况 | 第16-17页 |
·传播媒介和宿主 | 第17-18页 |
·病毒传播途径 | 第18-19页 |
3 诊断方法 | 第19-22页 |
·SFTS临床表现 | 第19页 |
·细胞培养和病毒分离 | 第19-20页 |
·病毒核酸检测 | 第20-21页 |
·病毒血清学检测 | 第21-22页 |
4 治疗及预防控制 | 第22-23页 |
·治疗 | 第22页 |
·预防控制 | 第22-23页 |
5 本研究的主要研究内容、目的与意义 | 第23-24页 |
第二章 SFTSV全基因组测序及分子进化分析 | 第24-54页 |
1 前言 | 第24页 |
2 实验材料 | 第24-26页 |
·细胞及样本 | 第24页 |
·主要试剂和仪器设备 | 第24-26页 |
3 实验方法 | 第26-41页 |
·提取病毒RNA | 第26-27页 |
·荧光定量RT-PCR鉴定 | 第27-28页 |
·细胞培养 | 第28-30页 |
·病毒分离培养 | 第30-31页 |
·SFTSV全基因组序列扩增引物设计 | 第31-41页 |
·基因组核苷酸序列分析比较 | 第41页 |
4 结果与分析 | 第41-51页 |
·荧光定量RT-PCR检测结果 | 第41-42页 |
·病毒分离结果 | 第42-43页 |
·全基因组PCR扩增结果 | 第43-44页 |
·测序结果与序列分析 | 第44-45页 |
·SFTSV基于3个片段的分子系统进化树 | 第45-49页 |
·白蛉病毒属基于3个片段分子系统结构树 | 第49-51页 |
5 讨论 | 第51-54页 |
第三章 SFTSV核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达分析 | 第54-75页 |
1 前言 | 第54页 |
2 实验材料 | 第54-56页 |
·实验毒株、载体及菌株 | 第54页 |
·主要试剂和仪器设备 | 第54-56页 |
3 实验方法 | 第56-67页 |
·原核表达载体构建图 | 第56-57页 |
·核衣壳蛋白基因扩增及纯化 | 第57-59页 |
·克隆载体的构建 | 第59-60页 |
·阳性克隆鉴定 | 第60-62页 |
·原核表达载体的构建 | 第62-63页 |
·重组蛋白的诱导表达 | 第63-65页 |
·重组蛋白的大量表达 | 第65-67页 |
·重组蛋白Western blot分析 | 第67页 |
4 结果与分析 | 第67-72页 |
·SFTSV核衣壳蛋白基因克隆 | 第67-68页 |
·克隆载体pMD19T-SFTSV-NP构建 | 第68-69页 |
·原核表达载体pET-42a(+)-SFTSV-NP构建 | 第69-70页 |
·重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第70-71页 |
·重组蛋白的Western Blot分析 | 第71-72页 |
5 讨论 | 第72-75页 |
参考文献 | 第75-83页 |
附录 | 第83-86页 |
l 抗生素及培养基配制方法 | 第83页 |
2 主要实验溶液配制方法 | 第83-86页 |
致谢 | 第86-88页 |