| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 图表目录 | 第12-14页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-32页 |
| ·冠状病毒概述 | 第15-26页 |
| ·冠状病毒的分类 | 第16-17页 |
| ·冠状病毒的形态 | 第17-18页 |
| ·基因组结构及主要功能蛋白 | 第18-20页 |
| ·病毒复制转录机制 | 第20-22页 |
| ·病毒感染对宿主细胞的影响 | 第22-24页 |
| ·冠状病毒反向遗传学 | 第24-25页 |
| ·冠状病毒跨种属传播机制 | 第25-26页 |
| ·人冠状病毒NL63分子生物学 | 第26-31页 |
| ·HCoV-NL63分离与鉴定 | 第27页 |
| ·HCoV-NL63基因组结构 | 第27-28页 |
| ·HCoV-NL63分子流行病学 | 第28-29页 |
| ·HCoV-NL63系统发生与分类 | 第29-30页 |
| ·HCoV-NL63国内研究进展 | 第30-31页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 人冠状病毒NL63中国株全长cDNA克隆与序列分析 | 第32-48页 |
| ·材料和方法 | 第32-38页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·主要试剂和细胞 | 第32-33页 |
| ·样本采集与鉴定 | 第33页 |
| ·NL63病毒的分离培养 | 第33-34页 |
| ·病毒RNA提取及反转录 | 第34-35页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·3'-RACE PCR克隆 | 第36-37页 |
| ·5'-RACE PCR克隆 | 第37页 |
| ·各目的片段PCR克隆、测序 | 第37页 |
| ·HCoV-NL63系统发生分析 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-46页 |
| ·NL63病毒的分离培养 | 第38页 |
| ·3'-RACE PCR克隆 | 第38页 |
| ·5'-RACE PCR克隆 | 第38-39页 |
| ·各目的片段PCR克隆 | 第39页 |
| ·HCoV-NL63全基因序列拼接及分析 | 第39-43页 |
| ·HCoV-NL63系统发生分析 | 第43-45页 |
| ·NL63国内株基因重组分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第三章 HCoV-NL63中国株全长cDNA感染性克隆的构建与拯救 | 第48-73页 |
| ·技术路线 | 第49-50页 |
| ·材料和方法 | 第50-59页 |
| ·病毒和细胞 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·体外连接策略 | 第50-51页 |
| ·Overlapping PCR | 第51页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·目的片段的克隆 | 第52-53页 |
| ·各个目的片段的制备 | 第53-54页 |
| ·目的片段酶切 | 第54页 |
| ·目的片段体外连接 | 第54-55页 |
| ·目的片段的纯化 | 第55-56页 |
| ·体外转录 | 第56页 |
| ·电转染 | 第56-57页 |
| ·病毒拯救 | 第57页 |
| ·分子Marker验证 | 第57页 |
| ·Western blot实验 | 第57-58页 |
| ·IFA实验 | 第58-59页 |
| ·一步生长曲线测定 | 第59页 |
| ·实验结果 | 第59-70页 |
| ·目的片段融合PCR | 第59-60页 |
| ·六个目的片段的获得 | 第60-62页 |
| ·各个目的片段的制备 | 第62页 |
| ·目的片段的体外连接 | 第62-63页 |
| ·体外转录 | 第63页 |
| ·电转染与病毒拯救 | 第63-65页 |
| ·ic-NL63病毒拯救 | 第63-64页 |
| ·ic-NL63-gfp重组病毒的拯救 | 第64-65页 |
| ·分子Marker的鉴定 | 第65-66页 |
| ·IFA和Western blot实验 | 第66-68页 |
| ·免疫荧光实验 | 第66-67页 |
| ·Western blot实验 | 第67-68页 |
| ·病毒拯救株一步生长曲线的测定 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第四章 全文总结 | 第73-75页 |
| ·本论文主要结论 | 第73-74页 |
| ·本论文创新点 | 第74页 |
| ·尚待进一步解决的问题 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 附录 | 第84-98页 |
| 发表综述 | 第98-107页 |
| 参考文献 | 第104-107页 |
| 附件 | 第107-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 个人简历 | 第115页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第115页 |