| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一篇 文献综述 | 第12-32页 |
| 1 PED简介 | 第12页 |
| 2 PEDV概述 | 第12-16页 |
| ·PEDV粒子结构 | 第12-15页 |
| ·PEDV理化与培养特性 | 第15-16页 |
| ·PEDV生物学分类地位 | 第16页 |
| 3 PED流行特点和流行情况 | 第16-19页 |
| 4 PED发病机理 | 第19页 |
| 5 PED诊断技术 | 第19-22页 |
| 6 PED的防治 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-32页 |
| 第二篇 研究内容 | 第32-82页 |
| 第一章 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立与流行病学调查 | 第32-46页 |
| 摘要 | 第32-33页 |
| 1 材料 | 第33页 |
| ·毒株及被检样本 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-36页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·反转录制备cDNA | 第34页 |
| ·PCR条件的优化 | 第34-35页 |
| ·敏感性实验 | 第35页 |
| ·特异性实验 | 第35页 |
| ·病料的采集与RT-PCR方法的临床应用 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-41页 |
| ·PCR反应条件的优化及反应体系的确定 | 第36-37页 |
| ·敏感性试验 | 第37-38页 |
| ·特异性试验 | 第38-39页 |
| ·病料RT-PCR检测结果 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| ABSTRACT | 第44-46页 |
| 第二章 PEDV部分S蛋白的原核表达 | 第46-66页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| ·载体与菌种 | 第47页 |
| ·病毒、细胞与参考血清 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-56页 |
| ·引物合成 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR扩增目的片段 | 第48页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第48页 |
| ·PCR产物与原核表达载体的酶切处理 | 第48-49页 |
| ·酶切产物的回收和纯化 | 第49页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白的表达和鉴定 | 第51-54页 |
| ·重组蛋白稳定性分析 | 第54页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第54页 |
| ·重组蛋白溶解性的判定 | 第54页 |
| ·重组蛋白的大量诱导和纯化 | 第54-56页 |
| 3 结果 | 第56-61页 |
| ·S582基因的PCR扩增 | 第56页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的测序 | 第57页 |
| ·重组蛋白S582的SDS-PAGE鉴定 | 第57-58页 |
| ·Western blot鉴定重组蛋白反应原性 | 第58页 |
| ·重组蛋白稳定性和反应原性分析 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白溶解性的判定 | 第60页 |
| ·重组蛋白的亲和纯化 | 第60-61页 |
| ·复性重组蛋白的抗原性分析 | 第61页 |
| ·不同批次重组蛋白质量检测 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| ABSTRACT | 第64-66页 |
| 第三章 PEDV间接ELISA检测方法的建立与应用 | 第66-82页 |
| 摘要 | 第66-67页 |
| 1 材料 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-70页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第67-68页 |
| ·抗原包被时间的选择 | 第68页 |
| ·封闭剂的选择 | 第68页 |
| ·封闭时间的确定 | 第68页 |
| ·一抗最佳反应时间的确定 | 第68页 |
| ·二抗最佳稀释倍数及反应时间的确定 | 第68页 |
| ·底物最佳反应时间的确定 | 第68-69页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第69页 |
| ·特异性分析 | 第69页 |
| ·敏感性分析 | 第69页 |
| ·符合率分析 | 第69页 |
| ·重复性实验 | 第69-70页 |
| ·临床应用 | 第70页 |
| 3 结果 | 第70-76页 |
| ·抗原最佳包被浓度及待检血清最佳稀释度的选择 | 第70-71页 |
| ·抗原最佳包被时间 | 第71页 |
| ·封闭液的选择 | 第71页 |
| ·封闭时间的确定 | 第71-72页 |
| ·一抗作用时间确定 | 第72页 |
| ·酶标二抗作用浓度和时间的确定 | 第72页 |
| ·底物最佳反应时间的确定 | 第72-73页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第73-74页 |
| ·特异性分析 | 第74页 |
| ·敏感性分析 | 第74页 |
| ·符合率分析 | 第74-75页 |
| ·重复性实验 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-80页 |
| ABSTRACT | 第80-82页 |
| 全文总结 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |