| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 引言 | 第15-41页 |
| 1 麻疯树概况和研究进展 | 第15-20页 |
| ·麻疯树形态特征和地理分布 | 第15-16页 |
| ·麻疯树成分分析和毒性分析 | 第16-17页 |
| ·麻疯树的资源利用 | 第17-19页 |
| ·麻疯树的药用价值 | 第17页 |
| ·麻疯树的经济价值 | 第17-18页 |
| ·麻疯树的其他用途 | 第18-19页 |
| ·麻疯树的研究进展 | 第19-20页 |
| 2 大片段基因组文库 | 第20-30页 |
| ·基因组文库的概况和发展 | 第20-23页 |
| ·BIBAC文库的特点及构建 | 第23-26页 |
| ·BIBAC文库的特点 | 第23-24页 |
| ·BIBAC文库的构建 | 第24-26页 |
| ·BIBAC文库的筛选方法 | 第26-27页 |
| ·大片段文库的应用 | 第27-30页 |
| ·基因组物理图谱构建 | 第27页 |
| ·基因的图位克隆 | 第27-28页 |
| ·基因组测序 | 第28页 |
| ·大片段基因组文库与比较基因组学研究 | 第28-29页 |
| ·开发分子标记 | 第29页 |
| ·BAC克隆与FISH相结合的应用 | 第29-30页 |
| 3 脂肪酸去饱和酶的研究进展 | 第30-39页 |
| ·植物不饱和脂肪酸概述 | 第30-31页 |
| ·脂肪酸去饱和酶的种类和分布 | 第31-32页 |
| ·脂肪酸去饱和酶的结构特点 | 第32-35页 |
| ·脂肪酸去饱和酶基因研究进展及应用 | 第35-39页 |
| ·植物FAD2的研究进展 | 第35-36页 |
| ·植物FAD3的研究进展 | 第36-37页 |
| ·植物其他脂肪酸去饱和酶的研究进展 | 第37-38页 |
| ·植物脂肪酸去饱和酶基因研究的应用 | 第38-39页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第39-40页 |
| 技术路线 | 第40-41页 |
| 材料和方法 | 第41-72页 |
| 1 材料 | 第41-44页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·菌株和载体 | 第41页 |
| ·主要药品和酶 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-72页 |
| ·麻疯树BIBAC文库构建 | 第44-54页 |
| ·高分子量基因组麻疯树DNA的制备(HMW DNA) | 第44-45页 |
| ·BIBAC载体pCLD0454的制备 | 第45-48页 |
| ·大片段DNA部分酶切以确定最佳酶切用量 | 第48-49页 |
| ·高分子量细胞核DNA大量酶切(第一次片段选择) | 第49-51页 |
| ·麻疯树DNA大片段的第二次片段选择 | 第51-52页 |
| ·大片段DNA与载体pCLD0454的连接和转化 | 第52页 |
| ·麻疯树基因组BIBAC文库插入片段分析 | 第52-53页 |
| ·麻疯树BIBAC文库稳定性检测 | 第53-54页 |
| ·麻疯树BIBAC文库的保存 | 第54页 |
| ·麻疯树脂肪酸代谢相关基因的筛选 | 第54-61页 |
| ·高密度DNA杂交膜的制备 | 第54-56页 |
| ·麻疯树脂肪酸代谢途径相关基因的筛选 | 第56-61页 |
| ·麻疯树FAD3基因的克隆及表达分析 | 第61-65页 |
| ·RNA的提取 | 第61页 |
| ·FAD3基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·连接及转化大肠杆菌DH5a | 第62-63页 |
| ·生物信息学分析 | 第63页 |
| ·JcFAD3在麻疯树中的表达分析 | 第63-65页 |
| ·麻疯树JcFAD3在酿酒酵母中的表达 | 第65-68页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第65-67页 |
| ·酵母感受态细胞的制备与转化 | 第67页 |
| ·转化酵母的菌落/菌液PCR检测 | 第67-68页 |
| ·酵母工程菌的诱导表达 | 第68页 |
| ·重组酵母菌表达产物的气相色谱分析 | 第68页 |
| ·麻疯树JcFAD3基因在拟南芥中过表达分析 | 第68-72页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·拟南芥培养 | 第69页 |
| ·真空渗入法转化拟南芥 | 第69-70页 |
| ·转基因拟南芥种子的筛选 | 第70页 |
| ·拟南芥阳性转化体鉴定 | 第70-71页 |
| ·转JcFAD3拟南芥脂肪酸检测 | 第71-72页 |
| 结果与分析 | 第72-100页 |
| 1 麻疯树BIBAC文库的构建 | 第72-78页 |
| ·高分子量基因组DNA的制备(HMW DNA) | 第72-73页 |
| ·BIBAC载体pCLD0454的制备 | 第73页 |
| ·大片段DNA部分酶切以确定最佳酶切用量 | 第73-74页 |
| ·HWM DNA两次片段选择 | 第74-75页 |
| ·大片段DNA与载体pCLD0454的连接和转化 | 第75-76页 |
| ·麻疯树BIBAC文库的保存和插入片段的检测 | 第76-77页 |
| ·BIBAC文库稳定性的检测 | 第77-78页 |
| 2 麻疯树脂肪酸代谢相关基因的筛选 | 第78-88页 |
| ·麻疯树BIBAC高密度杂交膜的制备 | 第78-79页 |
| ·麻疯树脂肪酸代谢途径相关基因在文库中的筛选 | 第79-82页 |
| ·FAD7和FAD3 BIBAC克隆测序分析 | 第82-88页 |
| 3 麻疯树FAD3基因的克隆及表达分析 | 第88-95页 |
| ·JcFAD3基因cDNA的获得及序列分析 | 第88-92页 |
| ·总RNA样品检测 | 第88页 |
| ·JcFAD3基因的克隆 | 第88-89页 |
| ·JcFAD3蛋白氨基酸序列同源性及进化树分析 | 第89-91页 |
| ·麻疯树FAD3的理化性质和结构域分析 | 第91-92页 |
| ·JcFAD3基因在不同组织部位的表达分析 | 第92-93页 |
| ·Real-time PCR标准品制备 | 第92-93页 |
| ·JcFAD3基因在麻疯树不同组织部位的表达分析 | 第93页 |
| ·JcFAD3在麻疯树种子形成过程中的表达分析 | 第93-94页 |
| ·不同温度和不同诱导时间下JcFAD3的表达分析 | 第94-95页 |
| 4 JcFAD3在酿酒酵母中的表达 | 第95-96页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第95页 |
| ·JcFAD3在酵母中的表达分析 | 第95-96页 |
| 5 JcFAD3基因在植物中的功能分析 | 第96-100页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第96-97页 |
| ·转JcFAD3基因拟南芥筛选与阳性植株的鉴定 | 第97-98页 |
| ·T1代抗性苗筛选 | 第97页 |
| ·转基因T1代抗性苗的PCR检测 | 第97-98页 |
| ·JcFAD3转基因拟南芥叶片脂肪酸分析 | 第98-100页 |
| 讨论 | 第100-110页 |
| 1 麻疯树BIBAC文库的构建 | 第100-105页 |
| ·高分子量基因组DNA的制备技术(HWM DNA) | 第100-101页 |
| ·BIBAC载体的提取和纯化 | 第101-102页 |
| ·最佳限制性内切酶酶量的确定和基因组DNA大片段的选择 | 第102-103页 |
| ·大片段DNA与载体的连接和转化 | 第103-104页 |
| ·麻疯树BIBAC文库的鉴定 | 第104页 |
| ·麻疯树脂肪酸代谢途径相关基因的筛选 | 第104-105页 |
| 2 麻疯树FAD3基因的序列分析 | 第105-106页 |
| 3 麻疯树FAD3基因的表达分析 | 第106-108页 |
| 4 JcFAD3基因在酿酒酵母中的表达分析 | 第108-110页 |
| 结论 | 第110-113页 |
| 参考文献 | 第113-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
| 博士学习期间发表论文 | 第134页 |
