| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 缩略词一览表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-47页 |
| 第一节 海藻糖的特性、分布以及应用前景 | 第17-24页 |
| ·海藻糖结构 | 第17-18页 |
| ·海藻糖的生物学功能 | 第18-21页 |
| ·海藻糖的应用 | 第21-24页 |
| 第二节 海藻糖的生产以及合成途径 | 第24-30页 |
| ·海藻糖的生产方法 | 第24页 |
| ·海藻糖合成途径 | 第24-30页 |
| 第三节 海藻糖合酶研究进展 | 第30-35页 |
| ·海藻糖合酶的来源及酶学性质 | 第30页 |
| ·海藻糖合酶的结构特性 | 第30-33页 |
| ·海藻糖合酶催化机制的研究 | 第33-35页 |
| 第四节 蛋白的定向进化技术 | 第35-43页 |
| ·理性蛋白设计 | 第35-37页 |
| ·非理性蛋白设计 | 第37-41页 |
| ·化学修饰 | 第41页 |
| ·海藻糖合酶的改造进展 | 第41-43页 |
| 第五节 选题依据和技术路线 | 第43-47页 |
| ·选题依据 | 第43-44页 |
| ·实验背景 | 第44-46页 |
| ·技术路线 | 第46-47页 |
| 第二章 红色亚栖热菌海藻糖合酶不同片段功能的研究 | 第47-99页 |
| 第一节 实验材料 | 第47-53页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·质粒 | 第47-48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要试剂以及培养基配制 | 第49-52页 |
| ·引物 | 第52-53页 |
| 第二节 实验方法 | 第53-66页 |
| ·TSMN 与 TSMC 截短蛋白的克隆，表达及性质测定 | 第53-60页 |
| ·红色亚栖热菌海藻糖合酶 C 端截短蛋白的克隆、表达及酶学性质分析 | 第60-62页 |
| ·嗜热栖热菌海藻糖合酶基因的克隆、表达与酶学性质分析 | 第62-64页 |
| ·杂合蛋白 TSTtMr 与 TSMrTt 的克隆、表达与酶学性质分析 | 第64-66页 |
| 第三节 结果与分析 | 第66-89页 |
| ·TSMN 与 TSMC 截短蛋白的克隆、表达与或性质分析 | 第66-74页 |
| ·红色亚栖热菌海藻糖合酶 C 端截短蛋白ΔC104、ΔC68 以及ΔC44 的克隆、表达与活性测定 | 第74-79页 |
| ·嗜热栖热菌海藻糖合酶（TST）的克隆与活性测定 | 第79-84页 |
| ·杂合蛋白 TSTtMr 与 TSMrTt 的表达、纯化与酶学性质分析 | 第84-89页 |
| 第四节 讨论 | 第89-97页 |
| ·嗜热菌海藻糖合酶的分子特征 | 第89-90页 |
| ·截短蛋白二级结构分析 | 第90-94页 |
| ·截短蛋白及杂合蛋白的功能分析 | 第94-97页 |
| 第五节 小结 | 第97-99页 |
| 第三章 红色亚栖热菌海藻糖合酶三维结构模拟及关键氨基酸位点的初步预测 | 第99-124页 |
| 第一节 实验材料 | 第99-104页 |
| ·菌株 | 第99页 |
| ·质粒 | 第99-100页 |
| ·主要试剂 | 第100页 |
| ·主要仪器 | 第100-101页 |
| ·培养基以及配制试剂 | 第101-103页 |
| ·引物 | 第103-104页 |
| 第二节 实验方法 | 第104-107页 |
| ·红色亚栖热菌海藻糖合酶蛋白三维结构模拟 | 第104页 |
| ·红色亚栖热菌海藻糖合酶蛋白关键氨基酸位点预测 | 第104页 |
| ·定点突变 | 第104-105页 |
| ·突变蛋白的表达与纯化 | 第105-106页 |
| ·突变蛋白功能测定 | 第106-107页 |
| ·突变蛋白温度耐受检测 | 第107页 |
| ·圆二色光谱法测定蛋白的二级结构 | 第107页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第107-118页 |
| ·红色亚栖热菌海藻糖合酶同源建模及模型评价 | 第107-110页 |
| ·突变位点的预测 | 第110-112页 |
| ·定点突变的构建、表达与活性分析 | 第112-115页 |
| ·R392A、R392F 的纯化、活性以及二级结构的研究 | 第115-118页 |
| 第四节 讨论 | 第118-123页 |
| ·红色亚栖热菌海藻糖合酶三维模型的构建 | 第118-120页 |
| ·关键氨基酸位点的初步预测 | 第120-121页 |
| ·保守区的定点突变 | 第121-122页 |
| ·Y135、R388、R392 定点突变 | 第122-123页 |
| 第五节 小结 | 第123-124页 |
| 第四章 红色亚栖热菌海藻糖合酶定向进化条件的建立 | 第124-162页 |
| 第一节 实验材料 | 第124-128页 |
| ·实验所用菌株 | 第124-125页 |
| ·质粒 | 第125页 |
| ·主要试剂 | 第125-126页 |
| ·主要仪器 | 第126页 |
| ·培养基与配制试剂 | 第126-127页 |
| ·引物 | 第127-128页 |
| 第二节 实验方法 | 第128-132页 |
| ·高通量初筛方法的建立 | 第128-129页 |
| ·复筛方法 | 第129页 |
| ·易错 PCR（error-prone PCR，ep PCR）扩增红色亚栖热菌海藻糖合酶基因 | 第129页 |
| ·DNA 改组（DNA shuffling） | 第129-131页 |
| ·DNA 小片段回收 | 第131页 |
| ·突变体文库的构建 | 第131-132页 |
| ·突变体文库的筛选 | 第132页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第132页 |
| ·蛋白性质 | 第132页 |
| ·蛋白与 DNA 序列比对 | 第132页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第132-155页 |
| ·高通量初筛方法的建立 | 第132-136页 |
| ·易错 PCR 条件的建立 | 第136-139页 |
| ·易错 PCR 突变子库的构建和筛选 | 第139-141页 |
| ·全长基因 DNA shuffling 方法的建立 | 第141-147页 |
| ·分段 DNA shuffling | 第147-153页 |
| ·突变子 shm9 的活性分析 | 第153-155页 |
| 第四节 讨论 | 第155-160页 |
| ·影响易错 PCR 的因素 | 第155-159页 |
| ·影响 DNA shuffling 的因素 | 第159-160页 |
| 第五节 小结 | 第160-162页 |
| 第五章 结论与展望 | 第162-166页 |
| ·结论 | 第162-164页 |
| ·主要创新点 | 第164-165页 |
| ·相关工作的前景展望 | 第165-166页 |
| 参考文献 | 第166-177页 |
| 致谢 | 第177-178页 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第178-180页 |
