| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| ·褪黑激素 | 第11-13页 |
| ·褪黑激素 | 第11页 |
| ·褪黑激素的生物合成与代谢 | 第11-12页 |
| ·褪黑激素的来源与组织分布 | 第12-13页 |
| ·褪黑激素节律性分泌 | 第13页 |
| ·褪黑激素的生理功能 | 第13-16页 |
| ·褪黑激素对繁殖系统的影响 | 第13页 |
| ·褪黑激素对消化系统的影响 | 第13-14页 |
| ·褪黑激素的抗肿瘤作用 | 第14页 |
| ·褪黑激素对免疫系统的影响 | 第14页 |
| ·褪黑激素对动物绒毛生长的影响 | 第14-16页 |
| ·褪黑激素受体及其分布 | 第16页 |
| ·褪黑激素受体 | 第16页 |
| ·褪黑激素受体的分布 | 第16页 |
| ·端粒酶逆转录酶与成纤维细胞的永生化 | 第16-19页 |
| ·细胞的衰老 | 第16-17页 |
| ·端粒与端粒酶逆转录酶 | 第17-18页 |
| ·永生化 | 第18-19页 |
| ·细胞永生化的概念 | 第18页 |
| ·细胞永生化的方法 | 第18-19页 |
| ·实验技术路线 | 第19页 |
| ·结语 | 第19-20页 |
| 2 实验研究 | 第20-39页 |
| ·永生化内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞系的建立 | 第20-28页 |
| ·材料与方法 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·质粒pCI-neo-hTERT 转化及鉴定 | 第21页 |
| ·新霉素(G418)最佳筛选浓度的确定 | 第21页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒转染绒山羊成纤维细胞 | 第21页 |
| ·G418 筛选及阳性细胞的获得 | 第21-22页 |
| ·转染细胞的纯化 | 第22页 |
| ·RT-PCR 法检测转染细胞中外源性hTERT 的表达 | 第22页 |
| ·细胞总 RNA 的制备 | 第22页 |
| ·目的基因的RT-PCR 扩增 | 第22页 |
| ·生长曲线的测定 | 第22-23页 |
| ·染色体核型检测 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-25页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒扩增和酶切鉴定 | 第23页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒纯度和浓度 | 第23-24页 |
| ·细胞最佳 G418 筛选浓度的确定 | 第24页 |
| ·转染后阳性细胞的获得 | 第24页 |
| ·转染细胞的hTERT 基因的 RT-PCR 检测 | 第24-25页 |
| ·细胞生长曲线 | 第25页 |
| ·细胞核型分析 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-28页 |
| ·真核表达载体pEGFP-N1/MT1 的构建 | 第28-35页 |
| ·材料与方法 | 第28-30页 |
| ·组织材料 | 第28页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第28页 |
| ·内蒙古绒山羊下丘脑组织总RNA 提取 | 第28页 |
| ·绒山羊 MT1cDNA 的合成 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的回收与 T-A 克隆 | 第29-30页 |
| ·真核表达型重组质粒pEGFP-N1/MT1 的构建 | 第30页 |
| ·真核表达型重组质粒pEGFP-N1/MT1 酶切鉴定 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-32页 |
| ·下丘脑组织总 RNA 的制备及MT1 全长cDNA 片段的获得与鉴定 | 第30-31页 |
| ·绒山羊 PCR 产物测序结果 | 第31页 |
| ·重组真核表达质粒pEGFP-N1/MT1 的鉴定 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-35页 |
| ·MT1 基因转染永生化皮肤成纤维细胞的筛选和鉴定 | 第35-39页 |
| ·材料与方法 | 第35-36页 |
| ·MT1 基因转染 hTERT-GSFs 细胞 | 第35页 |
| ·单细胞克隆的筛选 | 第35页 |
| ·RT-PCR 法检测 MT1 mRNA 及 EGFP 的表达 | 第35-36页 |
| ·生长曲线的测定 | 第36页 |
| ·染色体核型分析 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-38页 |
| ·脂质体转染 hTERT-GSFs 及筛选 | 第36-37页 |
| ·MT1 基因及 EGFP 的表达检测结果 | 第37-38页 |
| ·细胞生长曲线 | 第38页 |
| ·染色体核型分析 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 3 结论 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-49页 |
| 附录 | 第49-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
