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连作生姜根际土壤微生物群落结构分析

中文摘要第1-12页
Abstract第12-14页
1 前言第14-31页
   ·连作障碍的研究现状第15-16页
     ·连作生物障碍理论第15-16页
     ·连作土壤理化性质第16页
     ·生姜连作障碍研究现状第16页
   ·生姜主要土传病害第16-17页
     ·生姜茎腐病第16-17页
     ·生姜斑点病第17页
     ·生姜姜瘟病第17页
   ·植物根际促生细菌(PGPR)第17-18页
   ·生物防治第18-20页
     ·拮抗菌生防机理第18页
     ·拮抗细菌在植物病害防治中的优势第18-19页
     ·生防细菌主要种类第19-20页
       ·芽孢杆菌第19页
       ·假单胞菌第19页
       ·类芽孢杆菌第19-20页
     ·生防拮抗菌的研究现状第20页
   ·微生物多样性第20-21页
     ·微生物表型多样性研究第21页
     ·微生物遗传多样性研究第21页
   ·微生物群落多样性分析方法第21-27页
     ·环境基因组 16S rDNA 的 PCR 扩增第22页
     ·ARDRA第22-23页
     ·T-RFLP(Terminal restriction fragment length polymorphism)第23-24页
     ·变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)第24-25页
     ·16S rDNA 文库第25-27页
   ·生物群落多样性的测度第27-28页
     ·物种多样性指数测度第27页
     ·物种丰富度指数测度第27-28页
     ·物种均匀度指数测度第28页
   ·生物群落梯度分析第28-29页
     ·直接梯度分析(Direct gradient analysis)第28页
     ·间接梯度分析(Indirect gradient analysis)第28-29页
     ·典型对应分析第29页
     ·冗余分析第29页
     ·约束直接梯度分析(Constrained direct gradient analysis)第29页
   ·本研究的立项依据、研究内容及技术路线第29-31页
     ·立项依据第29-30页
     ·研究内容第30-31页
     ·技术路线第31页
2 材料与方法第31-44页
   ·样品的采集第31-32页
   ·病原菌第32页
   ·培养基第32页
   ·生化试剂及主要溶液配制第32-34页
   ·仪器设备第34页
   ·PCR 引物第34页
   ·根际土壤样品总 DNA 的提取及 16S rDNA 的 PCR 扩增第34-35页
     ·样品总 DNA 的提取第34页
     ·16S rDNA 的 PCR 扩增第34-35页
     ·真菌 18S 序列 PCR 扩增第35页
     ·PCR 扩增产物的纯化第35页
   ·T-RFLP 分析第35-36页
     ·荧光 PCR 产物的限制性酶切第35-36页
     ·酶切产物的基因扫描第36页
   ·生姜根际土壤微生物 DGGE 分析第36页
   ·16S rDNA 文库第36-38页
     ·PCR 产物的连接第36页
     ·转化第36-37页
     ·阳性克隆的筛选第37页
     ·ARDRA 分型第37-38页
   ·土壤理化指标的测定第38页
   ·数据分析第38-41页
     ·T-RFLP 分析第38-39页
       ·细菌群落多样性分析第38页
       ·去趋势对应分析(DCA)第38-39页
       ·典型对应分析(CCA)第39页
     ·16S rDNA 克隆文库分析第39-40页
       ·序列分析第39-40页
       ·文库统计数据分析第40页
     ·生姜根际微生物 DGGE 分析第40-41页
     ·生姜根际拮抗菌的 ARDRA 分析第41页
   ·生姜根际茎腐病和斑点病拮抗菌的筛选第41页
   ·生姜根际姜瘟病拮抗菌的筛选第41-42页
   ·DNA 的提取第42页
   ·生姜根际拮抗菌 ARDRA 分析第42-43页
   ·核苷酸序列登录号第43-44页
3 结果与分析第44-74页
   ·生姜根际土壤微生物群落结构分析第44-56页
     ·T-RFLP 分析第44-47页
       ·样品的 T-RFLP 图谱分析第44-45页
       ·多样性指数分析第45-46页
       ·特殊 T-RFLP 与环境因子之间关系第46页
       ·基于 T-RFLP 的主成分分析第46-47页
     ·DGGE 分析第47-50页
       ·不同种植年限生姜根际微生物 DGGE 图谱分析第47-48页
       ·多样性指数分析第48-49页
       ·基于 DGGE 微生物种群聚类图第49-50页
     ·16S rDNA 克隆文库分析第50-56页
       ·文库的构建第50-51页
         ·阳性克隆子的验证第50页
         ·16S rDNA 扩增片段的 ARDRA 分型第50-51页
         ·嵌合体检测及库容的估算第51页
       ·基于 16S rDNA 克隆文库的细菌多样性分析第51-56页
         ·生姜根际细菌系统发育分析第51-55页
         ·基于 16S rDNA 文库的细菌多样性指数分析第55-56页
   ·土壤理化性质分析第56-60页
     ·土壤理化性质测定第56-57页
     ·特征 T-RFs 与环境因子之间的关系(CCA 分析)第57页
     ·土壤细菌群落与环境因子之间的关系(RDA 分析)第57-60页
   ·大田生姜连作对土壤中可培养微生物数量的影响第60-61页
   ·生姜根际拮抗菌筛选及拮抗能力测定结果第61-64页
     ·生姜根际拮抗菌的筛选结果第61-62页
     ·根际拮抗菌拮抗能力测定结果第62-64页
   ·生姜拮抗菌 ARDRA 及 16S rDNA 序列分析第64-72页
     ·拮抗菌 DNA 提取第64页
     ·生姜根际拮抗菌的 16S rDNA 的 PCR 扩增第64-65页
     ·PCR 扩增产物限制性内切酶酶切图谱第65-66页
     ·PCR 扩增产物限制性酶切图谱分析及 16S rDNA 序列分析第66-72页
       ·生姜茎腐病根际拮抗菌 ARDRA 及 16S rDNA 序列分析第67-69页
       ·生姜斑点病根际拮抗菌 ARDRA 及 16S rDNA 序列分析第69-70页
       ·生姜根际姜瘟病拮抗菌 ARDRA 及 16S rDNA 序列分析第70-72页
   ·形态特征观察结果第72-74页
4 讨论第74-80页
5 结论第80-81页
参考文献第81-93页
附表第93-99页
致谢第99页

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