| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-18页 |
| 引言 | 第18-25页 |
| 1.牙鲆概述 | 第18-19页 |
| 2.DICER 研究概述 | 第19-21页 |
| 3.RNAI 基因敲除技术概述 | 第21-22页 |
| 4.MICRORNA 研究概述 | 第22-24页 |
| 5.研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第一章 牙鲆 DICER 基因的克隆及结构分析 | 第25-52页 |
| ·实验仪器与材料 | 第25-27页 |
| ·实验鱼类和样品采集 | 第25页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第25-26页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-36页 |
| ·总 RNA 的提取与鉴定 | 第27页 |
| ·牙鲆 Dicer 基因 cDNA 的克隆 | 第27-35页 |
| ·RNA 反转录 | 第27-28页 |
| ·牙鲆 Dicer 基因小片段克隆 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的纯化与回收 | 第29页 |
| ·连接与转化反应 | 第29-30页 |
| ·菌落 PCR | 第30-31页 |
| ·5’-RACE PCR | 第31-34页 |
| ·3’-RACE PCR | 第34-35页 |
| ·牙鲆 Dicer 基因序列分析 | 第35-36页 |
| ·序列拼接 | 第35页 |
| ·Dicer 基因氨基酸序列分析 | 第35-36页 |
| ·牙鲆 Dicer 蛋白结构预测 | 第36页 |
| ·实验结果 | 第36-51页 |
| ·抽提 RNA 质量鉴定 | 第36-37页 |
| ·牙鲆 Dicer 基因克隆 | 第37-40页 |
| ·牙鲆 Dicer 基因序列比对及进化树分析 | 第40-43页 |
| ·牙鲆 Dicer 的蛋白结构预测 | 第43-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第二章 牙鲆 DICER 基因的表达 | 第52-58页 |
| ·实验仪器与材料 | 第52-53页 |
| ·实验鱼类和样品采集 | 第52页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第52-53页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·反转录 | 第53页 |
| ·荧光定量 PCR | 第53-54页 |
| ·统计分析 | 第54页 |
| ·实验结果 | 第54-57页 |
| ·Dicer 基因在牙鲆早期发育时期和成体组织的表达 | 第54-56页 |
| ·甲状腺激素牙鲆变态时期对 Dicer 的调控 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第三章 LIN-28B、PRE-LET-7D1 和 LET-7D 在牙鲆早期发育时期的表达 | 第58-68页 |
| ·实验仪器与材料 | 第58页 |
| ·实验鱼类和样品采集 | 第58页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第58页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·Dicer、Lin-28b 和 pre-let-7d1 模板的反转录 | 第58-59页 |
| ·let-7d 模板的反转录 | 第59页 |
| ·荧光定量 PCR | 第59-60页 |
| ·统计分析 | 第60页 |
| ·实验结果 | 第60-66页 |
| ·Lin-28b、pre-let-7d1 和 let-7d mRNA 在牙鲆早期发育时期的表达 | 第60-63页 |
| ·牙鲆变态时期甲状腺激素对 Lin-28b、pre-let-7d1 和 let-7d 的调控 | 第63-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 牙鲆胚胎细胞中 DICER 基因的沉默 | 第68-77页 |
| ·实验仪器与材料 | 第68-69页 |
| ·实验所用牙鲆胚胎细胞 | 第68页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第68页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-71页 |
| ·siRNA 片段的设计和合成 | 第69页 |
| ·细胞传代培养 | 第69页 |
| ·脂质体介导的 siRNA 转染 | 第69-70页 |
| ·总 RNA 的提取与鉴定 | 第70页 |
| ·RNA 反转录 | 第70页 |
| ·Dicer、Lin-28b 和 pre-let-7d1 模板的反转录 | 第70页 |
| ·let-7d 模板的反转录 | 第70页 |
| ·荧光定量 PCR | 第70-71页 |
| ·统计分析 | 第71页 |
| ·实验结果 | 第71-76页 |
| ·抽提 RNA 质量鉴定 | 第71页 |
| ·胚胎细胞中 Dicer 沉默效果检测 | 第71-72页 |
| ·胚胎细胞中 let-7d、Lin-28b 和 pre-let-7d1 的表达检测 | 第72-74页 |
| ·甲状腺激素对 Dicer-siRNA 的调控 | 第74页 |
| ·胚胎细胞中甲状腺激素受体（TRα-A 和 TRβ）的表达检测 | 第74-76页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| 小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
