| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 略语表 | 第12-13页 |
| 目录 | 第13-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-30页 |
| 1 转基因技术 | 第15-16页 |
| ·农杆菌介导的植物转基因 | 第15页 |
| ·单子叶植物中农杆菌介导的转基因研究 | 第15-16页 |
| 2 植物病毒的侵染性克隆技术 | 第16-17页 |
| ·体外转录法获得病毒的侵染性克隆 | 第16页 |
| ·农杆菌介导的植物病毒侵染性克隆 | 第16-17页 |
| 3 狗尾草花叶病毒的研究现状 | 第17-25页 |
| ·狗尾草花叶病毒生物学性状 | 第17-23页 |
| ·病毒基因组结构特点 | 第23-25页 |
| 4 植物病毒的应用 | 第25-29页 |
| ·植物病毒作为外源蛋白的表达载体 | 第25-27页 |
| ·植物病毒作为病毒介导的基因沉默载体 | 第27-29页 |
| 5 本文的研究目的与意义 | 第29-30页 |
| ·研究目的与意义 | 第29页 |
| ·研究内容 | 第29-30页 |
| 第二部分 研究内容 | 第30-83页 |
| 1 材料与方法 | 第30-43页 |
| ·载体和寄主 | 第30页 |
| ·酶和试剂 | 第30页 |
| ·研究策略 | 第30-34页 |
| ·设计依据 | 第30-32页 |
| ·实施方案 | 第32-34页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·引物磷酸化方法 | 第34页 |
| ·PCR 方法 | 第34-36页 |
| ·连接与重组质粒转化 | 第36页 |
| ·重组质粒筛选方法 | 第36-38页 |
| ·酶切鉴定重组质粒 | 第38页 |
| ·测序与比对方法 | 第38-39页 |
| ·农杆菌的活化与接种 | 第39-41页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第39页 |
| ·农杆菌转化 | 第39-40页 |
| ·农杆菌浸润接种 | 第40-41页 |
| ·病毒转接 | 第41页 |
| ·植物总 RNA 提取 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR 检测方法 | 第42-43页 |
| 2 实验过程 | 第43-52页 |
| ·狗尾草花叶病毒农杆菌侵染性克隆构建 | 第43-49页 |
| ·pCB301-FoMV 重组质粒的分段克隆构建 | 第43-49页 |
| ·重组质粒农杆菌转化与病毒接种 | 第49页 |
| ·病毒活性验证 | 第49页 |
| ·构建含有多克隆位点的 VIGS 载体 | 第49-51页 |
| ·PCR 扩增目的片段： | 第50页 |
| ·酶切获得载体： | 第50页 |
| ·连接并转化 | 第50-51页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第51页 |
| ·阳性质粒的酶切鉴定 | 第51页 |
| ·构建 pCB301-FoMV-PDS 以及 pCB301-FoMV-GFP | 第51页 |
| ·目的片段的获得： | 第51页 |
| ·载体获得： | 第51页 |
| ·连接转化及重组质粒鉴定 | 第51页 |
| ·瞬时表达-农杆菌共浸润 | 第51页 |
| ·重组病毒活性验证 | 第51-52页 |
| 3 实验结果与分析 | 第52-80页 |
| ·FoMV 农杆菌侵染性克隆构建结果与分析 | 第52-68页 |
| ·重组质粒分段克隆结果 | 第52-61页 |
| ·重组病毒的寄主生物学表型结果与分析 | 第61-64页 |
| ·重组病毒的活性验证结果与分析 | 第64-68页 |
| ·含有多克隆位点的 VIGS 载体质粒的构建与鉴定结果 | 第68-71页 |
| ·pCB301-FoMV-PDS 以及 pCB301-FoMV-GFP 的构建与鉴定结果 | 第71-74页 |
| ·寄主生物学表型与分析 | 第74-78页 |
| ·在本氏烟上的表型分析 | 第75-77页 |
| ·在大麦上的表型分析 | 第77-78页 |
| ·病毒的分子检测结果与分析 | 第78-80页 |
| ·在本氏烟上的分子检测结果与分析 | 第78-79页 |
| ·在大麦上的分子检测结果与分析 | 第79-80页 |
| 4 总结与讨论 | 第80-83页 |
| 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 附录：重要溶液的配制 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
