| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 技术路线 | 第13-14页 |
| 材料与方法 | 第14-32页 |
| 实验结果 | 第32-50页 |
| 第一部分 人冠状病毒 NL63 受体结合区蛋白的表达纯化与鉴定 | 第32-41页 |
| 1 HCoV-NL63 RS 与 RL 蛋白基因的合成及表达载体构建与鉴定 | 第32-34页 |
| ·HCoV-NL63 RBD(L) 蛋白基因的合成及密码子优化 | 第32页 |
| ·HCoV-NL63 RBD(L) 、RBD(S)蛋白基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·重组表达质粒 pM48-RS 和 pM48-RL 的构建 | 第33-34页 |
| ·重组表达质粒 pM48-RS 和 pM48-RL 的鉴定 | 第34页 |
| 2 HCoV-NL63 RS 与 RL 融合蛋白表达条件优化与确定 | 第34-37页 |
| ·表达菌株的筛选 | 第34-36页 |
| ·RS 与 RL 蛋白表达形式及最佳诱导表达条件的确定 | 第36-37页 |
| 3 HCoV-NL63 RS 与 RL 融合蛋白的纯化研究 | 第37-39页 |
| ·重组融合蛋白 RS 的纯化 | 第37-38页 |
| ·重组融合蛋白 RL 的纯化 | 第38-39页 |
| ·重组融合蛋白产率的初步计算 | 第39页 |
| 4 HCoV-NL63 RS 与 RL 融合蛋白的 WB 鉴定 | 第39-41页 |
| 第二部分 重组 RBD 蛋白用于 HCoV-NL63 基因工程疫苗免疫小鼠后抗体的检测 | 第41-43页 |
| 1 抗原最佳包被浓度的确定 | 第41页 |
| 2 交叉反应的确定 | 第41-42页 |
| 3 测定小鼠血清中特异性抗体滴度 | 第42-43页 |
| 第三部分 重组 RBD 蛋白用于 HCoV-NL63 感染人群抗体检测 | 第43-50页 |
| 1 WBLA(Western Blotting Line Assay)方法的建立及与 IFA 方法检测结果的比较 | 第43-48页 |
| ·WBLA 方法的建立 | 第43-44页 |
| ·基于 RL 或 RS 蛋白的 WBLA 灵敏度检测 | 第44页 |
| ·WBLA 检测人群中特异性抗体 | 第44-48页 |
| 2 ELISA 方法的初步探索 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-53页 |
| 全文小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 综述 | 第57-65页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 作者简介 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
