| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-39页 |
| 1 壬基酚的毒性与污染现状 | 第16-20页 |
| ·壬基酚的来源、特征与毒性 | 第16页 |
| ·壬基酚的国内污染现状 | 第16-18页 |
| ·壬基酚的国外污染现状 | 第18-19页 |
| ·壬基酚的生物积累效应 | 第19-20页 |
| 2 壬基酚对动物的生殖毒性研究进展 | 第20-26页 |
| ·壬基酚对生殖细胞的毒性 | 第20-21页 |
| ·壬基酚对性别分化的影响 | 第21-22页 |
| ·壬基酚对性腺组织结构的影响 | 第22-23页 |
| ·氧化损伤在生殖毒性中的作用 | 第23页 |
| ·壬基酚对生殖相关的内分泌系统和遗传毒性的影响 | 第23-26页 |
| 3 壬基酚的生物检测研究背景 | 第26-32页 |
| ·环境介质中壬基酚检测的研究 | 第26-27页 |
| ·壬基酚生物监测中应用的主要动物 | 第27页 |
| ·壬基酚生物监测中应用的主要标志物 | 第27-32页 |
| 4 家蚕作为毒理学研究替代动物的研究背景 | 第32-36页 |
| ·家蚕生殖细胞的发生 | 第32-33页 |
| ·家蚕生殖发育相关基因 | 第33-35页 |
| ·家蚕的生物学特性及其在生物检测研究中的应用 | 第35-36页 |
| 5 研究内容与目的及意义 | 第36-39页 |
| ·研究内容 | 第37页 |
| ·技术路线 | 第37-38页 |
| ·研究目的及意义 | 第38-39页 |
| 第二章 主要试剂与常用实验方法 | 第39-49页 |
| 1 常用材料与试剂 | 第39-41页 |
| ·家蚕品种 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要试剂盒 | 第40页 |
| ·缓冲液和常用溶液 | 第40-41页 |
| ·核酸电泳相关试剂 | 第41页 |
| ·生物信息学资源及分析软件 | 第41页 |
| 2 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 3 基本实验方法 | 第42-49页 |
| ·总 RNA 的抽提 | 第42-43页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第43页 |
| ·PCR 扩增反应程序及加样体系 | 第43页 |
| ·实时定量 PCR（Real-Time PCR） | 第43-44页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第44页 |
| ·石蜡组织切片的制备 | 第44-45页 |
| ·免疫组化（IHC）步骤 | 第45-49页 |
| 第三章 壬基酚对家蚕生殖发育影响及机制研究 | 第49-59页 |
| 1 材料与方法 | 第49-51页 |
| ·家蚕品种 | 第49页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第49页 |
| ·剂量选择与实验分组 | 第49页 |
| ·家蚕 P0 代性腺指数，性比的计算 | 第49-50页 |
| ·家蚕产卵力和子代孵化率的调查 | 第50页 |
| ·HPLC 法检测壬基酚在家蚕体内各组织的分布 | 第50页 |
| ·组织病理学的检测 | 第50-51页 |
| ·数据处理 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-58页 |
| ·4-NP 对家蚕性比的影响 | 第51-52页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕产卵力和子代孵化率的影响 | 第52-54页 |
| ·4-NP 暴露在家蚕体内各组织的分布 | 第54-55页 |
| ·组织病理学的检测 | 第55-58页 |
| 3 讨论与结论 | 第58-59页 |
| 第四章 壬基酚暴露对家蚕生殖腺的氧化应激影响 | 第59-80页 |
| 第一节 家蚕生殖腺保护酶系 I 对壬基酚暴露的氧化应激反应 | 第59-68页 |
| 1 材料和方法 | 第59-63页 |
| ·供试家蚕品种 | 第59页 |
| ·家蚕处理与取材方法 | 第59-60页 |
| ·组织酶活性测定 | 第60-62页 |
| ·实时荧光定量 PCR 测定组织抗氧化酶相关基因表达 | 第62页 |
| ·数据处理 | 第62-63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-66页 |
| ·4-NP 暴露后家蚕不同发育期生殖腺 MDA 量的变化 | 第63-64页 |
| ·4-NP 暴露后家蚕不同发育期生殖腺 SOD 活性及其基因表达的变化 | 第64-65页 |
| ·4-NP 暴露后家蚕不同发育期生殖腺 CAT 活性及其基因表达的变化 | 第65-66页 |
| 3 讨论与结论 | 第66-68页 |
| 第二节 家蚕生殖腺保护酶系Ⅱ对壬基酚暴露的氧化应激反应 | 第68-77页 |
| 1 材料和方法 | 第68-71页 |
| ·供试家蚕品种 | 第68页 |
| ·家蚕处理与取材方法 | 第68页 |
| ·组织酶活性测定 | 第68-70页 |
| ·实时荧光定量 PCR 测定组织抗氧化酶相关基因表达 | 第70-71页 |
| ·数据处理 | 第71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-76页 |
| ·4-NP 暴露后家蚕不同发育期生殖腺 GSH 量的变化 | 第71-72页 |
| ·4-NP 暴露后家蚕不同发育期生殖腺 GST 酶活性及其基因表达的变化 | 第72-74页 |
| ·4-NP 暴露后家蚕不同发育期生殖腺 GPx 酶活性及其基因表达的变化 | 第74-76页 |
| 3 讨论与结论 | 第76-77页 |
| 第三节 本章讨论与结论 | 第77-80页 |
| 第五章 壬基酚暴露对家蚕生殖发育相关基因表达的影响 | 第80-99页 |
| 第一节 壬基酚暴露对家蚕雌性性别相关基因 Vg 和 Esp 表达的影响 | 第80-88页 |
| 1 材料和方法 | 第80-82页 |
| ·供试家蚕品种 | 第80页 |
| ·家蚕处理与取材方法 | 第80-81页 |
| ·总 RNA 的提取及 cDNA 第 1 条链的合成 | 第81页 |
| ·引物设计 | 第81页 |
| ·电子表达谱查询 | 第81-82页 |
| ·家蚕 Vg 和 Esp 基因的组织表达分析 | 第82页 |
| ·家蚕 Vg 和 Esp 基因的发育时期表达分析 | 第82页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 Vg 和 Esp 基因表达影响 | 第82页 |
| ·免疫组化 | 第82页 |
| ·数据处理 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-86页 |
| ·电子表达谱 | 第82-83页 |
| ·组织表达谱和发育时期表达谱 | 第83页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 Vg 基因表达影响 | 第83-84页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 Esp 基因表达影响 | 第84-85页 |
| ·免疫组化检测结果 | 第85-86页 |
| 3 讨论与结论 | 第86-88页 |
| 第二节 壬基酚暴露对家蚕雄性性别相关基因 SoxE 和 Stat 表达的影响 | 第88-93页 |
| 1 材料和方法 | 第88-89页 |
| ·供试家蚕品种 | 第88页 |
| ·家蚕处理与取材方法 | 第88页 |
| ·总 RNA 的提取及 cDNA 第 1 条链的合成 | 第88页 |
| ·引物设计 | 第88-89页 |
| ·芯片表达谱查询 | 第89页 |
| ·家蚕 SoxE 基因的发育时期表达分析 | 第89页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 SoxE 和 Stat 基因表达影响 | 第89页 |
| ·数据处理 | 第89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-92页 |
| ·基于基因芯片的 SoxE 和 Stat 组织表达谱 | 第89-90页 |
| ·SoxE 的发育时期表达谱 | 第90-91页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 SoxE 基因表达影响 | 第91页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 Stat 基因表达影响 | 第91-92页 |
| 3 讨论与结论 | 第92-93页 |
| 第三节 壬基酚暴露对家蚕 Vasa,EcR/Usp,Jun 表达的影响 | 第93-99页 |
| 1 材料和方法 | 第93-94页 |
| ·供试家蚕品种 | 第93页 |
| ·家蚕处理与取材方法 | 第93页 |
| ·总 RNA 的提取及 cDNA 第 1 条链的合成 | 第93页 |
| ·引物设计 | 第93-94页 |
| ·芯片表达谱查询 | 第94页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 Vasa，EcR/Usp 和 Jun 基因表达影响 | 第94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-98页 |
| ·基于基因芯片的 Vasa 组织表达谱 | 第94-95页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 Vasa 表达的影响 | 第95-96页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 EcR/Usp 表达的影响 | 第96-97页 |
| ·4-NP 暴露对家蚕 Jun 表达的影响 | 第97-98页 |
| 3 讨论与结论 | 第98-99页 |
| 第六章 壬基酚对雄性家蚕生殖腺和生殖细胞体外培养的影响 | 第99-108页 |
| 第一节 4-NP 对家蚕生殖腺的体外培养的影响 | 第99-103页 |
| 1 材料和方法 | 第99-100页 |
| ·供试家蚕品种 | 第99页 |
| ·4-NP 浓度的选择 | 第99页 |
| ·血淋巴的制备 | 第99页 |
| ·家蚕性腺组织体外悬滴培养 | 第99-100页 |
| ·组织酶活性测定 | 第100页 |
| ·生殖发育相关基因 SoxE 的表达分析 | 第100页 |
| ·数据处理 | 第100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-103页 |
| ·离体生殖腺培养观察 | 第100-101页 |
| ·组织病理学的变化 | 第101页 |
| ·雄性生殖细胞抗氧化酶活性的诱导 | 第101-102页 |
| ·4-NP 暴露精巢细胞中 SoxE mRNA 表达量变化 | 第102-103页 |
| 3 讨论与结论 | 第103页 |
| 第二节 4-NP 对家蚕雄性生殖细胞体外培养的影响 | 第103-108页 |
| 1 材料和方法 | 第103-105页 |
| ·供试家蚕品种 | 第103-104页 |
| ·家蚕血清的制备 | 第104页 |
| ·培养液中 4-NP 的添加方法 | 第104页 |
| ·家蚕生精囊的体外培养 | 第104页 |
| ·家蚕细胞毒性检测 | 第104页 |
| ·数据处理 | 第104-105页 |
| 2 结果与分析 | 第105-106页 |
| ·4-NP 对家蚕生精囊生长发育的影响 | 第105-106页 |
| ·4-NP 对生殖细胞毒性分析 | 第106页 |
| 3 讨论与结论 | 第106-108页 |
| 综合结论与创新点 | 第108-111页 |
| 1 综合结论 | 第108-109页 |
| 2 主要创新点 | 第109-110页 |
| 3 进一步要研究的内容 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-127页 |
| 攻读学位期间公开发表的论文与申请的专利 | 第127-129页 |
| 攻读学位期间主持和参与的科研项目 | 第129-130页 |
| 附录1 文中所用缩略语一览表 | 第130-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
