| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第7-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-34页 |
| ·聚合酶链式反应技术研究进展 | 第13-19页 |
| ·聚合酶链式反应的概念 | 第13页 |
| ·聚合酶链式反应的原理 | 第13-14页 |
| ·聚合酶链式反应的历史 | 第14-15页 |
| ·聚合酶链式反应技术的主要特点 | 第15-16页 |
| ·聚合酶链式反应技术的主要应用 | 第16-19页 |
| ·实验研究中的应用 | 第16-17页 |
| ·医学中的应用 | 第17页 |
| ·感染性疾病检测中的应用 | 第17-18页 |
| ·法医学中的应用 | 第18页 |
| ·古生物学中的应用 | 第18-19页 |
| ·热稳定性DNA聚合酶的研究进展 | 第19-23页 |
| ·嗜热微生物的研究进展 | 第19页 |
| ·极端嗜热微生物的主要特征及耐热机理 | 第19-21页 |
| ·嗜热DNA聚合酶的发现和应用 | 第21-23页 |
| ·DNA复制的机理 | 第21-23页 |
| ·古细菌DNA复制的相关研究 | 第23页 |
| ·热稳定DNA聚合酶的研究概况 | 第23-26页 |
| ·热稳定DNA聚合酶的概念和分类 | 第23-24页 |
| ·热稳定DNA聚合酶的发现和应用 | 第24-25页 |
| ·高保真DNA聚合酶的研究 | 第25-26页 |
| ·热稳定DNA聚合酶的分离与表达研究进展 | 第26页 |
| ·DNA聚合酶辅助蛋白的研究进展 | 第26-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第27-32页 |
| ·表达系统简介 | 第27-28页 |
| ·表达系统的载体 | 第28-29页 |
| ·表达系统的菌株 | 第29页 |
| ·表达载体的整合方式及转化方法 | 第29-30页 |
| ·表达载体的整合方式 | 第29页 |
| ·表达载体的转化方法 | 第29-30页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第30-31页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达的主要步骤 | 第30页 |
| ·影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的主要因素 | 第30-31页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达的优势和劣势 | 第31-32页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达的主要优点 | 第31-32页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达的主要缺点 | 第32页 |
| ·本文的研究背景及研究目的 | 第32-34页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第34-44页 |
| ·材料 | 第34-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第34-35页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·质粒 | 第34-35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·试剂和酶 | 第35页 |
| ·仪器和设备 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·毕赤酵母表达用引物 | 第37页 |
| ·聚合酶保真性验证用引物 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-44页 |
| ·质粒DNA的抽提及纯化 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌的快速转化 | 第39页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的诱导与表达 | 第39页 |
| ·PCR产物的T4 DNA聚合酶处理 | 第39页 |
| ·His融合蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第40-41页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞制备 | 第41页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第41-42页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的高密度诱导表达 | 第42页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第42页 |
| ·糖基化分析 | 第42-43页 |
| ·pfusso酶扩增忠实性分析 | 第43-44页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第44-61页 |
| ·毕赤酵母重组表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·PFUSSO聚合酶在毕赤酵母中表达及SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| ·PFUSSO聚合酶在毕赤酵母中表达条带的质谱分析 | 第47-49页 |
| ·PFUSSO聚合酶在大肠杆菌中表达及SDS-PAGE分析 | 第49-51页 |
| ·最佳诱导时间及浓度测定 | 第51页 |
| ·酶学性质分析 | 第51-54页 |
| ·扩增性能分析 | 第51-53页 |
| ·聚合酶延伸速率分析 | 第53-54页 |
| ·聚合酶热稳定性分析 | 第54-56页 |
| ·聚合酶的糖基化分析 | 第56-57页 |
| ·聚合酶扩增忠实性分析 | 第57-61页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·筛选高表达菌株 | 第61-62页 |
| ·聚合酶酶活性测定以及比活力分析 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE电泳出现三条带的原因分析 | 第62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
