| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| ·病原学 | 第13-14页 |
| ·细菌形态及染色特性 | 第13页 |
| ·细菌培养特性及理化特性 | 第13-14页 |
| ·APP血清分型 | 第14页 |
| ·流行病学 | 第14-16页 |
| ·毒力因子与致病机理 | 第16-19页 |
| ·致病机理 | 第16页 |
| ·毒力因子 | 第16-19页 |
| ·诊断 | 第19-23页 |
| ·临床诊断 | 第20页 |
| ·病原学诊断 | 第20-21页 |
| ·分子生物学方法 | 第21-22页 |
| ·血清学方法 | 第22-23页 |
| ·研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 材料 | 第24-29页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·病料 | 第24页 |
| ·载体及实验动物 | 第24页 |
| ·菌株及血清 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要培养基 | 第25页 |
| ·主要实验仪器 | 第25页 |
| ·主要溶液配制 | 第25-29页 |
| ·细菌培养液的配制 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖电泳所用溶液的配制 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE所用溶液的配制 | 第26-27页 |
| ·蛋白纯化相关溶液的配制 | 第27页 |
| ·ELISA相关试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·Western-Blot相关溶液的配制 | 第28页 |
| ·其他试剂的配制 | 第28-29页 |
| 3 实验方法 | 第29-45页 |
| ·APP的分离鉴定及其生物学特性研究 | 第29-32页 |
| ·细菌分离 | 第29页 |
| ·细菌的生化特性鉴定及药物敏感实验 | 第29-30页 |
| ·细菌的分子生物学鉴定(PCR) | 第30-31页 |
| ·血清型鉴定 | 第31页 |
| ·细菌生长曲线的测定 | 第31-32页 |
| ·动物致病实验 | 第32页 |
| ·APP NqrA基因的克隆及表达载体的构建 | 第32-38页 |
| ·APP基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·NqrA基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·目的片段的凝胶回收 | 第34-35页 |
| ·目的片段末端加“A”反应 | 第35页 |
| ·pMD-NqrA载体的构建 | 第35-36页 |
| ·克隆子的筛选和鉴定 | 第36-38页 |
| ·nqrA蛋白的体外表达 | 第38-43页 |
| ·pET32a-NqrA原核表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·pET32a-NqrA重组质粒的筛选和鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的原核表达 | 第40页 |
| ·表达产物的检测 | 第40-41页 |
| ·表达蛋白的可溶性检测 | 第41页 |
| ·存在于上清中的蛋白纯化 | 第41-42页 |
| ·Western Blot检测 | 第42-43页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第43-45页 |
| ·间接ELISA的操作步骤 | 第43页 |
| ·间接ELISA反应条件的确定 | 第43-44页 |
| ·间接ELISA特异性实验 | 第44-45页 |
| ·间接ELISA敏感性实验 | 第45页 |
| ·间接ELISA批内及批间重复性实验 | 第45页 |
| ·临床初步应用 | 第45页 |
| 4 结果 | 第45-64页 |
| ·细菌的分离鉴定及生物学特性研究 | 第45-51页 |
| ·细菌的培养特性及形态 | 第45-46页 |
| ·细菌的生化特性鉴定 | 第46-47页 |
| ·细菌药敏实验结果 | 第47-48页 |
| ·细菌的分子生物学鉴定(PCR) | 第48-49页 |
| ·血清型鉴定 | 第49页 |
| ·细菌生长曲线的测定 | 第49-50页 |
| ·细菌致病性实验 | 第50-51页 |
| ·NqrA基因的克隆及表达载体的构建 | 第51-54页 |
| ·NqrA基因的PCR扩增 | 第51页 |
| ·pMD-NqrA质粒的鉴定 | 第51-53页 |
| ·原核表达质粒pET32a-NqrA的鉴定 | 第53-54页 |
| ·pET32a-Nqra质粒的原核表达 | 第54-57页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第54-55页 |
| ·融合蛋白的存在形式的鉴定 | 第55-56页 |
| ·蛋白的纯化 | 第56-57页 |
| ·Western blot鉴定 | 第57页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第57-64页 |
| ·重组蛋白抗原最适包被浓度和血清最佳稀释浓度的确定 | 第57-59页 |
| ·酶标二抗最佳稀释浓度的确定 | 第59页 |
| ·最佳抗原抗体反应时间的确定 | 第59-60页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第60页 |
| ·底物最佳反应时间的确定 | 第60-61页 |
| ·ELISA阴阳临界值的确定 | 第61页 |
| ·间接ELISA特异性实验结果 | 第61-62页 |
| ·间接ELISA敏感性实验结果 | 第62页 |
| ·间接ELISA重复性实验结果 | 第62-64页 |
| ·临床应用结果 | 第64页 |
| 5. 讨论 | 第64-67页 |
| ·细菌的生物学特性 | 第64-65页 |
| ·目的基因的选择 | 第65-66页 |
| ·重组质粒的蛋白表达 | 第66-67页 |
| ·ELISA实验 | 第67页 |
| 6 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78页 |