| Abstract | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Index | 第5-7页 |
| 1. Introduction | 第7-13页 |
| ·L-arginine Biosynthesis and Metabolism | 第7-9页 |
| ·Significance of NADPH during L-arginine Biosynthesis | 第9页 |
| ·NAD kinase and NADPH formation | 第9-10页 |
| ·Other Roles of NADP(H) | 第10-11页 |
| ·Co-factor engineering | 第11页 |
| ·Significance of Oxygen Supply during fermentation | 第11页 |
| ·Research Objective | 第11-13页 |
| 2. Materials and methods | 第13-27页 |
| ·Medium and Culture | 第13-14页 |
| ·The media | 第13页 |
| ·The culture method | 第13-14页 |
| ·Reagents and preparation of chemicals | 第14页 |
| ·Common Biochemical reagents | 第14页 |
| ·Enzymes, kits and other consumables | 第14页 |
| ·Antibiotic preparation | 第14页 |
| ·Lsozyme preparation | 第14-15页 |
| ·SDS-PAGE | 第15-16页 |
| ·SDS-PAGE electrophoresis reagents preparation | 第15页 |
| ·SDS-PAGE electrophoresis gel preparation | 第15-16页 |
| ·Instruments | 第16页 |
| ·The experiment methods | 第16-23页 |
| ·The fermentation parameters analysis | 第16-18页 |
| ·Bradford method for the determination of total protein | 第18页 |
| ·Assay of NAD+kinase activity | 第18-19页 |
| ·Assay of NADH Kinase activity | 第19-21页 |
| ·Assay of Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase | 第21页 |
| ·Determination of intracellular NAD, NADH, NADP, NADPH concentrations | 第21-23页 |
| ·Strains, plasmids and oligonucleotide primers | 第23页 |
| ·Construction of PCR products in T-vector | 第23-24页 |
| ·Preparation of competent E. coli JM109 and Transformation | 第24页 |
| ·Recombinant plasmid extraction from E. coli | 第24-25页 |
| ·Recombinant plasmid sequencing | 第25页 |
| ·Construction of sticky gene fragment and vector pJC1-tac | 第25页 |
| ·Corynebacterium competent cell preparation for electric shock transformation | 第25-27页 |
| 3. Results and Discussion | 第27-37页 |
| ·Construction of recombinant plasmid pMD19-T –ppnK | 第27-28页 |
| ·Construction of NAD kinase expression strain | 第28页 |
| ·Corynebaterium crenatum SYPA5-5 recombinant strains screening | 第28-29页 |
| ·Effects of homologous NAD kinase overexpression on Cell growth and glucose consumption | 第29-31页 |
| ·Enzymatic activity of NAD+kinase and NADH kinase | 第31-32页 |
| ·Molecular weight determination | 第32-33页 |
| ·Enzymatic Activity of Glucose-6-Phosphate dehydrogenase | 第33页 |
| ·Intracellular concentrations of NAD (H) and NADP (H) | 第33-34页 |
| ·Improved L-arginine biosynthesis through NAD kinase overexpression | 第34-37页 |
| 4. Conclusion and Recommendation | 第37-39页 |
| ·Conclusion | 第37页 |
| ·Recommendation | 第37-39页 |
| Acknowledgements | 第39-41页 |
| Reference | 第41-45页 |
| Appendix | 第45-47页 |
| Appendix1: Papers published from this work | 第45-47页 |
| Appendix 2: The nucleotide sequence of the NAD kinase fromCorynebacterium crenatum SYPA5-5 | 第47页 |
