| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| 1. 植物对逆境的应答机制 | 第11页 |
| 2. 细胞壁蛋白研究进展 | 第11-14页 |
| ·富含脯氨酸蛋白HyPRP | 第11页 |
| ·脂转移蛋LTP | 第11-14页 |
| ·LTP与角质和蜡质的形成 | 第12-13页 |
| ·LTP与信号转导 | 第13页 |
| ·LTP与抗菌反应 | 第13-14页 |
| 3. EARLI1家族基因研究进展 | 第14-15页 |
| 4. pET原核表达载体 | 第15-16页 |
| 5. 酿酒酵母表达体系 | 第16-17页 |
| 6. 植物在抵御病原体侵袭时的应答机制 | 第17-19页 |
| 7. 本研究的内容和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 EARLI1基因编码序列的计算机分析 | 第20-24页 |
| 1. 方法 | 第20页 |
| 2. 结果 | 第20-23页 |
| ·EARLI1序列分析 | 第20页 |
| ·EARLI1 8CM的计算机建模分析 | 第20-23页 |
| 3. 讨论 | 第23-24页 |
| 第三章 拟南芥EARLI1基因的克隆 | 第24-32页 |
| 1. 材料 | 第24-25页 |
| ·Col-0野生型拟南芥的培养 | 第24页 |
| ·质粒和菌株 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| 2. 方法 | 第25-30页 |
| ·目的基因的克隆 | 第25-27页 |
| ·引物的设计 | 第25-26页 |
| ·Col-0拟南芥基因组DNA的提取(CTAB法) | 第26页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第27页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第27-28页 |
| ·CaCl_2法制备E.coil DH5α感受态细胞 | 第28页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的筛选鉴定 | 第28-30页 |
| ·阳性克隆的菌液PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第29页 |
| ·双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·测序 | 第30页 |
| 3. 结果 | 第30-31页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第30页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第30-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 第四章 利用大肠杆菌表达EARLI1重组蛋白 | 第32-42页 |
| 1. 材料 | 第32-34页 |
| ·质粒和菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第32-34页 |
| ·培养基的配制 | 第32-33页 |
| ·常规蛋白质电泳相关缓冲液 | 第33-34页 |
| 2. 方法 | 第34-39页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第34页 |
| ·插入片段的酶切和胶回收 | 第34页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第34页 |
| ·目的片段和载体的连接 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第35页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第35页 |
| ·测序 | 第35页 |
| ·生物信息学软件分析 | 第35-36页 |
| ·将重组质粒转入表达受体菌株 | 第36页 |
| ·EARLI1重组蛋白的诱导表达及表达条件的优化 | 第36-39页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第36页 |
| ·目的蛋白的定位分析 | 第36-37页 |
| ·培养基组分 | 第36-37页 |
| ·细胞周质组分 | 第37页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第37页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第37-38页 |
| ·Western免疫印迹检测 | 第38-39页 |
| ·转膜 | 第38页 |
| ·免疫学检测 | 第38-39页 |
| 3. 结果 | 第39-41页 |
| ·重组质粒的双酶切检测 | 第39页 |
| ·菌液PCR | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第40页 |
| ·EARLI1重组蛋白在大肠杆菌细胞中的表达方式 | 第40-41页 |
| ·EARLI1重组蛋白可溶性的Western blotting分析 | 第41页 |
| 4. 讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 EARLI1重组蛋白的纯化及功能分析 | 第42-50页 |
| 1. 主要试剂和培养基 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| 2. 方法 | 第43-45页 |
| ·EARLI1重组蛋白的大量表达 | 第43页 |
| ·EARLI1重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| ·EARLI1重组蛋白的活性分析 | 第43-45页 |
| ·EARLI1重组蛋白对蒜薹灰霉菌生长的抑制作用分析 | 第44页 |
| ·EARLI1重组蛋白对酵母菌生长的抑制作用分析 | 第44-45页 |
| ·酵母细胞的存活率分析 | 第44页 |
| ·细胞膜通透性分析 | 第44-45页 |
| ·EARLI1重组蛋白对棉花枯萎病菌生长的抑制作用 | 第45页 |
| 3. 结果 | 第45-49页 |
| ·EARLI1重组蛋白纯化效果和包涵体溶解 | 第45-46页 |
| ·EARLI1重组蛋白对蒜薹灰霉菌生长的抑制作用 | 第46页 |
| ·EARLI1重组蛋白对酵母菌生长的抑制作用 | 第46-47页 |
| ·细胞膜通透性 | 第47-48页 |
| ·EARLI1重组蛋白对棉花枯萎病菌生长的抑制作用 | 第48-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-50页 |
| 第六章 在细胞内表达EARLI1基因对酵母菌生长的抑制作用 | 第50-59页 |
| 1. 培养基和试剂 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| 2. 方法 | 第50-53页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·EARLI1转基因酵母细胞的培养和菌液PCR检测 | 第51-52页 |
| ·转EARLI1基因酵母的Western blot检测 | 第52-53页 |
| ·EARLI1蛋白的诱导表达 | 第52页 |
| ·酵母蛋白的提取 | 第52页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第52页 |
| ·Western免疫印迹检测 | 第52-53页 |
| ·EARLI1对酵母细胞生长的影响 | 第53页 |
| ·细胞膜通透性分析 | 第53页 |
| 3. 结果 | 第53-58页 |
| ·转EARLI1基因酵母的PCR检测 | 第53-54页 |
| ·转EARLI1基因酵母的Western免疫印迹分析 | 第54页 |
| ·转EARLI1基因酵母的生长情况 | 第54-55页 |
| ·细胞膜通透性 | 第55-58页 |
| 4. 讨论 | 第58-59页 |
| 第七章 拟南芥EARLI1基因对丁香假单胞菌的抗性分析 | 第59-63页 |
| 1. 材料 | 第59-60页 |
| ·EARLI1过表达株系的制备 | 第59页 |
| ·植物材料的准备 | 第59页 |
| ·植物病原体 | 第59页 |
| ·King’s B培养基 | 第59-60页 |
| ·染色液 | 第60页 |
| 2. 方法 | 第60-61页 |
| ·细菌的侵染及鉴定 | 第60页 |
| ·丁香假单胞菌处理后EARLI1的表达分析 | 第60-61页 |
| 3. 结果 | 第61-62页 |
| ·丁香假单胞菌对拟南芥的侵染情况 | 第61-62页 |
| ·台盼蓝和DAB染色 | 第61-62页 |
| ·丁香假单胞菌侵染对EARLI1表达的诱导作用 | 第62页 |
| 4. 讨论 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 1. 研究结论 | 第63页 |
| 2. 本研究的特色和创新 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
