| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| ·芽孢杆菌 | 第11-12页 |
| ·芽孢杆菌的特性及研究现状 | 第11-12页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌的主要应用 | 第12页 |
| ·纤溶酶在国内外的研究现状 | 第12-17页 |
| ·纤溶酶（原）的来源 | 第12-14页 |
| ·纤溶酶（原）的生理功能 | 第14-15页 |
| ·纤溶酶（原）活性的调节 | 第15-16页 |
| ·纤溶酶在微生物中的研究 | 第16-17页 |
| ·基因打靶技术 | 第17-22页 |
| ·基因打靶技术的理论基础 | 第18-19页 |
| ·基因打靶操作程序 | 第19-21页 |
| ·影响打靶效率的因素 | 第21-22页 |
| ·微生物基因敲除技术 | 第22页 |
| ·选题背景及主要的研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 豆豉纤溶酶对枯草杆菌 WB800 的影响 | 第24-37页 |
| ·试验材料 | 第24-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-30页 |
| ·碱裂解法提取 pBE3质粒 | 第27-28页 |
| ·枯草杆菌转化 | 第28页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第28-29页 |
| ·纤溶活性的测定 | 第29-30页 |
| ·蛋白含量的测定法 | 第30页 |
| ·豆豉纤溶酶对枯草杆菌 WB800 产孢的影响 | 第30页 |
| ·纤溶酶对枯草杆菌 WB800 耐受性的影响 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-36页 |
| ·卡那霉素抗性基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·尿激酶标准曲线 | 第31-32页 |
| ·重组菌 WB800/pBE3.DFE 的发酵试验及酶活曲线 | 第32-33页 |
| ·DFE 对枯草杆菌 WB800 产孢的影响 | 第33-34页 |
| ·DFE 对枯草杆菌 WB800 的耐受性的影响 | 第34-36页 |
| ·讨论 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 豆豉纤溶酶对解淀粉芽孢杆菌的影响 | 第37-56页 |
| ·材料与方法 | 第37-38页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·试剂的配制 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-45页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌总 DNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌 DH5a 感受态的制备 | 第39页 |
| ·DNA 凝胶回收 | 第39-40页 |
| ·连接反应 | 第40页 |
| ·豆豉纤溶酶基因 dfe 的克隆及鉴定 | 第40-42页 |
| ·敲除载体 PMD fe kan 的构建 | 第42-43页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌的电转化 | 第43页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌纤溶酶缺失菌株的验证 | 第43-44页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌 DC-12 及 DC-12⊿dfe 的发酵试验和纤溶活性的测定 | 第44页 |
| ·豆豉纤溶酶对解淀粉芽孢杆菌产孢的影响 | 第44页 |
| ·纤溶酶对解淀粉芽孢杆菌 DC-12 耐受性的影响 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-54页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌 DC-12 基因组提取 | 第45页 |
| ·豆豉纤溶酶基因的克隆及序列分析 | 第45-47页 |
| ·豆豉纤溶酶基因敲除载体的构建 | 第47-48页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌 DC-12 DFE 基因敲除及转化子筛选 | 第48-49页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌 DC-12 和解淀粉芽孢杆菌 DC-12⊿dfe 发酵试验及酶活曲线 | 第49-51页 |
| ·豆豉纤溶酶对解淀粉芽孢杆菌产孢 DC-12 的影响 | 第51页 |
| ·纤溶酶对解淀粉芽孢杆菌 DC-12 耐受性的影响 | 第51-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 纤溶酶的分离纯化及其胞外存在方式的初步探索 | 第56-65页 |
| ·材料与方法 | 第56页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·试验方法 | 第56-59页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌生长曲线与纤溶活性的测定 | 第56-57页 |
| ·纤溶活性的测定 | 第57页 |
| ·纤溶酶的分离纯化 | 第57-58页 |
| ·SDS PAGE 分析 | 第58-59页 |
| ·试验结果 | 第59-63页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌 DC-12 生长曲线与纤溶活性曲线的绘制 | 第59页 |
| ·纤溶酶 Sephadex G 75 的分离纯化 | 第59-61页 |
| ·层析液纤溶活性的定性研究 | 第61-62页 |
| ·CM Sepharose Fast Flow 层析 | 第62-63页 |
| ·CM Sepharose Fast Flow 洗脱液纤溶活性的测定 | 第63页 |
| ·SDS PAGE 电泳 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 结论与展望 | 第65-67页 |
| 1. 结论 | 第65-66页 |
| 2. 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附件 | 第77页 |
