中文摘要 | 第1-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
1. 引言 | 第12-24页 |
·PRRSV 病原学特性 | 第12-13页 |
·PRRSV 生物学特性 | 第13-17页 |
·PRRSV 的基因组结构 | 第14页 |
·PRRSV 的非结构蛋白 | 第14-15页 |
·PRRSV 的结构蛋白 | 第15-17页 |
·次要结构蛋白 | 第15-16页 |
·GP5 蛋白 | 第16页 |
·M 蛋白 | 第16-17页 |
·N 蛋白 | 第17页 |
·PRRSV 遗传变异 | 第17-18页 |
·PRRS 免疫学反应 | 第18-19页 |
·PRRSV 感染引起的体液免疫 | 第18-19页 |
·PRRSV 感染引起的细胞免疫 | 第19页 |
·PRRS 的防治 | 第19-20页 |
·PRRSV 受体研究 | 第20-21页 |
·NMHC-II 研究进展 | 第21-24页 |
2. 材料与方法 | 第24-38页 |
·材料 | 第24-27页 |
·细胞与病毒 | 第24页 |
·实验动物 | 第24页 |
·抗原及抗体 | 第24页 |
·实验试剂及耗材 | 第24页 |
·质粒与受体菌 | 第24页 |
·主要试剂及配制 | 第24-27页 |
·大肠杆菌感受态细胞制备及转化所需试剂 | 第24-25页 |
·SDS-PAGE 相关试剂 | 第25页 |
·蛋白纯化所需试剂 | 第25-26页 |
·细胞培养及单克隆抗体制备所需试剂 | 第26页 |
·ELISA、western blot 及免疫沉淀实验所需试剂 | 第26-27页 |
·单克隆抗体纯化所需试剂 | 第27页 |
·主要设备及仪器 | 第27页 |
·方法 | 第27-38页 |
·免疫原蛋白的表达纯化 | 第27-29页 |
·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞 E.coli(Rosetta) | 第27-28页 |
·重组质粒转化进受体菌 | 第28页 |
·大肠杆菌样品处理 | 第28-29页 |
·蛋白纯化 | 第29页 |
·免疫原的制备 | 第29页 |
·BABL/c 小鼠采血及免疫 | 第29-30页 |
·小鼠血清抗体效价检测 | 第30页 |
·骨髓瘤细胞 SP2/0 的培养 | 第30-31页 |
·细胞融合 | 第31-32页 |
·融合细胞检测及亚克隆 | 第32-33页 |
·阳性杂交瘤细胞的冻存 | 第33页 |
·ELISA 方法鉴定单克隆抗体的特异性 | 第33页 |
·单克隆抗体亚型鉴定 | 第33-34页 |
·腹水的制备 | 第34页 |
·单克隆抗体的纯化 | 第34-35页 |
·透析袋的处理 | 第34页 |
·粗提 IgG | 第34-35页 |
·Protein G Resin 纯化 | 第35页 |
·单克隆抗体结合域的确定 | 第35-36页 |
·间接 ELISA 鉴定单克隆抗体的结合域 | 第35页 |
·western blot 鉴定 PRA 蛋白单克隆抗体的结合域 | 第35-36页 |
·叠加 ELISA 鉴定单克隆抗体的抗原结合位点 | 第36页 |
·单克隆抗体与 Marc-145 细胞生物活性抗原的反应 | 第36-38页 |
·Marc-145 细胞的培养 | 第36-37页 |
·间接免疫荧光(Indirect florescent assay, IFA) | 第37页 |
·免疫沉淀实验(Immunoprecipitation, IP) | 第37-38页 |
3. 结果与分析 | 第38-45页 |
·免疫原蛋白表达纯化结果 | 第38页 |
·小鼠血清抗体效价检测结果 | 第38-39页 |
·细胞融合结果 | 第39页 |
·单克隆抗体亚类鉴定结果 | 第39-40页 |
·单克隆抗体特异性鉴定结果 | 第40页 |
·单克隆抗体效价检测结果 | 第40-41页 |
·单克隆抗体抗原结合域的 ELISA 鉴定结果 | 第41-42页 |
·PRA 蛋白单克隆抗体的结合域的 western blot 鉴定结果 | 第42-43页 |
·单克隆抗体饱和值测定结果 | 第43页 |
·叠加 ELISA 结果 | 第43页 |
·小鼠腹水纯化结果 | 第43-44页 |
·间接免疫荧光(IFA)实验结果 | 第44页 |
·免疫沉淀实验(IP)结果 | 第44-45页 |
4. 讨论 | 第45-48页 |
·关于单克隆抗体特异性的讨论 | 第46页 |
·单克隆抗体抗原表位分析 | 第46-47页 |
·免疫共沉淀方法探究 NMHC II-A、NMHC II-B 与 PRRSV 的相互作用 | 第47-48页 |
5. 结论 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-59页 |
致谢 | 第59-60页 |
硕士研究生期间发表文章情况 | 第60页 |