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非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A、B单克隆抗体的制备与鉴定

中文摘要第1-10页
Abstract第10-12页
1. 引言第12-24页
   ·PRRSV 病原学特性第12-13页
   ·PRRSV 生物学特性第13-17页
     ·PRRSV 的基因组结构第14页
     ·PRRSV 的非结构蛋白第14-15页
     ·PRRSV 的结构蛋白第15-17页
       ·次要结构蛋白第15-16页
       ·GP5 蛋白第16页
       ·M 蛋白第16-17页
       ·N 蛋白第17页
   ·PRRSV 遗传变异第17-18页
   ·PRRS 免疫学反应第18-19页
     ·PRRSV 感染引起的体液免疫第18-19页
     ·PRRSV 感染引起的细胞免疫第19页
   ·PRRS 的防治第19-20页
   ·PRRSV 受体研究第20-21页
   ·NMHC-II 研究进展第21-24页
2. 材料与方法第24-38页
   ·材料第24-27页
     ·细胞与病毒第24页
     ·实验动物第24页
     ·抗原及抗体第24页
     ·实验试剂及耗材第24页
     ·质粒与受体菌第24页
     ·主要试剂及配制第24-27页
       ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化所需试剂第24-25页
       ·SDS-PAGE 相关试剂第25页
       ·蛋白纯化所需试剂第25-26页
       ·细胞培养及单克隆抗体制备所需试剂第26页
       ·ELISA、western blot 及免疫沉淀实验所需试剂第26-27页
       ·单克隆抗体纯化所需试剂第27页
     ·主要设备及仪器第27页
   ·方法第27-38页
     ·免疫原蛋白的表达纯化第27-29页
       ·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞 E.coli(Rosetta)第27-28页
       ·重组质粒转化进受体菌第28页
       ·大肠杆菌样品处理第28-29页
       ·蛋白纯化第29页
     ·免疫原的制备第29页
     ·BABL/c 小鼠采血及免疫第29-30页
     ·小鼠血清抗体效价检测第30页
     ·骨髓瘤细胞 SP2/0 的培养第30-31页
     ·细胞融合第31-32页
     ·融合细胞检测及亚克隆第32-33页
     ·阳性杂交瘤细胞的冻存第33页
     ·ELISA 方法鉴定单克隆抗体的特异性第33页
     ·单克隆抗体亚型鉴定第33-34页
     ·腹水的制备第34页
     ·单克隆抗体的纯化第34-35页
       ·透析袋的处理第34页
       ·粗提 IgG第34-35页
       ·Protein G Resin 纯化第35页
     ·单克隆抗体结合域的确定第35-36页
       ·间接 ELISA 鉴定单克隆抗体的结合域第35页
       ·western blot 鉴定 PRA 蛋白单克隆抗体的结合域第35-36页
     ·叠加 ELISA 鉴定单克隆抗体的抗原结合位点第36页
     ·单克隆抗体与 Marc-145 细胞生物活性抗原的反应第36-38页
       ·Marc-145 细胞的培养第36-37页
       ·间接免疫荧光(Indirect florescent assay, IFA)第37页
       ·免疫沉淀实验(Immunoprecipitation, IP)第37-38页
3. 结果与分析第38-45页
   ·免疫原蛋白表达纯化结果第38页
   ·小鼠血清抗体效价检测结果第38-39页
   ·细胞融合结果第39页
   ·单克隆抗体亚类鉴定结果第39-40页
   ·单克隆抗体特异性鉴定结果第40页
   ·单克隆抗体效价检测结果第40-41页
   ·单克隆抗体抗原结合域的 ELISA 鉴定结果第41-42页
   ·PRA 蛋白单克隆抗体的结合域的 western blot 鉴定结果第42-43页
   ·单克隆抗体饱和值测定结果第43页
   ·叠加 ELISA 结果第43页
   ·小鼠腹水纯化结果第43-44页
   ·间接免疫荧光(IFA)实验结果第44页
   ·免疫沉淀实验(IP)结果第44-45页
4. 讨论第45-48页
   ·关于单克隆抗体特异性的讨论第46页
   ·单克隆抗体抗原表位分析第46-47页
   ·免疫共沉淀方法探究 NMHC II-A、NMHC II-B 与 PRRSV 的相互作用第47-48页
5. 结论第48-49页
参考文献第49-59页
致谢第59-60页
硕士研究生期间发表文章情况第60页

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