| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 1 防御素的分类和结构特征 | 第10-14页 |
| ·动物防御素 | 第10-13页 |
| ·α-防御素 | 第11页 |
| ·β-防御素 | 第11-12页 |
| ·θ-防御素 | 第12-13页 |
| ·昆虫类防御素 | 第13页 |
| ·植物类防御素 | 第13-14页 |
| 2 防御素的生物学活性 | 第14-18页 |
| ·抗细菌活性 | 第14-15页 |
| ·抗病毒活性 | 第15页 |
| ·免疫学活性 | 第15-17页 |
| ·细胞毒作用和抗肿瘤作用 | 第17页 |
| ·抗真菌作用 | 第17-18页 |
| 3 防御素的作用机理 | 第18页 |
| ·防御素抗细菌的作用机理 | 第18页 |
| ·防御素抗病毒的作用机理 | 第18页 |
| 4 防御素的应用前景 | 第18-21页 |
| ·防御素在医学中的应用 | 第18-19页 |
| ·防御素治疗肺部疾病 | 第18-19页 |
| ·防御素治疗黏膜疾病 | 第19页 |
| ·防御素的临床药用研究 | 第19-20页 |
| ·防御素在畜牧业中的应用 | 第20-21页 |
| 第二章 草鱼肠道β-防御素的分子克隆与重组载体的构建 | 第21-36页 |
| 1 实验材料与设备 | 第21-23页 |
| ·实验动物、菌种及质粒 | 第21页 |
| ·主要设备与仪器 | 第21-22页 |
| ·试剂与试剂盒 | 第22页 |
| ·接头与引物 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-32页 |
| ·动物材料处理 | 第23页 |
| ·总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·RNA含量和纯度的检测 | 第24页 |
| ·草鱼肠道β-防御素的RT-PCR | 第24-25页 |
| ·草鱼肠道β-防御素基因PCR扩增 | 第25页 |
| ·DNA核酸电泳检测 | 第25页 |
| ·PCR产物的提纯 | 第25页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第25-26页 |
| ·TA克隆 | 第26-27页 |
| ·PCR检测 | 第27-28页 |
| ·pMG-T-GBD质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·DNA定量 | 第29页 |
| ·pMG-T-GBD和pET32a(+)载体的双酶切 | 第29-30页 |
| ·酶切产物的回收与纯化 | 第30页 |
| ·GBD与pET32连接反应 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pET32-GBD的转化和蓝白斑筛选 | 第31页 |
| ·重组质粒pET32-GBD的PCR鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒pET32-GBD的提取 | 第31页 |
| ·重组质粒pET32-GBD的酶切 | 第31-32页 |
| ·重组载体pET32-GBD的测序鉴定 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-35页 |
| ·草鱼肠道β-防御素RT-PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·克隆载体pMG-T-GBD的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒pET32-GBD的PCR和酶切鉴定 | 第33-35页 |
| 4.讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 草鱼肠道β-防御素的高效表达及抗菌活性分析 | 第36-49页 |
| 1 实验材料与设备 | 第36-37页 |
| ·实验动物、菌种 | 第36页 |
| ·主要设备与仪器 | 第36-37页 |
| ·试剂与试剂盒 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-42页 |
| ·草鱼肠道β-防御素的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·细菌超声破碎 | 第38页 |
| ·草鱼肠道β-防御素表达蛋白的SDS-PAGE检测 | 第38页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白的透析 | 第39-40页 |
| ·草鱼肠道β-防御素多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白含量测定 | 第40-41页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白的Western-Blot鉴定 | 第41页 |
| ·重组肠激酶酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·抗菌活性测定 | 第42页 |
| ·抗菌谱分析 | 第42页 |
| 3 结果分析 | 第42-47页 |
| ·草鱼肠道重组β-防御素诱导表达结果分析 | 第42-43页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白的Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化 | 第43-44页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白的Western-Blot结果 | 第44-45页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白肠激酶酶切 | 第45页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白抗菌活性测定 | 第45-46页 |
| ·草鱼肠道β-防御素重组蛋白抗菌谱分析 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 主要英文缩写 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
