| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| ·烟草花叶病毒研究概况 | 第13-18页 |
| ·烟草花叶病毒的基因组结构 | 第13-16页 |
| ·TMV基因组编码的蛋白及功能 | 第14-16页 |
| ·126kDa、183kDa和54kDa蛋白 | 第14-15页 |
| ·30kDa蛋白 | 第15-16页 |
| ·17.6kDa蛋白 | 第16页 |
| ·TMV的侵染与复制 | 第16-17页 |
| ·TMV病毒粒体的自我组装 | 第17-18页 |
| ·黄瓜花叶病毒的研究概况 | 第18-20页 |
| ·黄瓜花叶病毒的基因组结构 | 第18-20页 |
| ·RNA1、RNA2 | 第19页 |
| ·RNA3、RNA4 | 第19页 |
| ·卫星RNA | 第19-20页 |
| ·CMV的侵染与复制 | 第20页 |
| ·植物源抗病毒活性物质的研究进展 | 第20-21页 |
| ·抗病毒活性成分抗病毒作用机理研究概况 | 第21-22页 |
| ·抗病毒侵染 | 第21页 |
| ·抑制病毒增殖 | 第21页 |
| ·诱导植物产生抗性 | 第21-22页 |
| ·作用于植物介体 | 第22页 |
| ·多方面协调作用 | 第22页 |
| ·本课题前人主要的研究成果 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第23-25页 |
| 2 三种药剂对TMV-RNA抑制作用 | 第25-52页 |
| ·材料与方法 | 第25-33页 |
| ·供试寄主、供试毒源及供试植物 | 第25页 |
| ·供试仪器和试剂 | 第25-26页 |
| ·半定量RT-PCR检测接种TMV后用三种药剂处理对TMV-RNA复制影响 | 第26-31页 |
| ·处理及检测 | 第26页 |
| ·半定量RT-PCR引物合成 | 第26页 |
| ·目的基因的克隆 | 第26-30页 |
| ·Trizol提取总RNA | 第27页 |
| ·RNA的反转录及PCR反应 | 第27-28页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第28页 |
| ·连接 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的简易制备 | 第29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·质粒提取 | 第29-30页 |
| ·重组克隆的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·测序 | 第30页 |
| ·半定量RT-PCR条件的优化 | 第30-31页 |
| ·半定量RT-PCR检测药剂处理48h对TMV基因组及亚基因组复制的影响 | 第31页 |
| ·real time-PCR检测Bruceine D对TMV核酸复制影响 | 第31-33页 |
| ·处理及检测 | 第31页 |
| ·引物合成 | 第31-32页 |
| ·RNA反转录及PCR反应 | 第32页 |
| ·目的基因及内参基因标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| ·处理及未处理样品中目的基因的相对定量 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-50页 |
| ·目的基因克隆 | 第33-36页 |
| ·PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·克隆 | 第34-35页 |
| ·测序 | 第35-36页 |
| ·半定量RT-PCR条件的优化 | 第36-39页 |
| ·退火温度优化 | 第36-37页 |
| ·Mg~(2+)浓度优化 | 第37-38页 |
| ·循环次数优化 | 第38-39页 |
| ·半定量RT-PCR检测药剂处理48h对TMV基因组及亚基因组复制的影响 | 第39-41页 |
| ·real time-PCR检测Bruceine D对TMV核酸复制影响 | 第41-50页 |
| ·目的基因和内参基因的PCR扩增产物电泳分析 | 第41-42页 |
| ·目的基因和内参基因的PCR扩增曲线 | 第42-44页 |
| ·目的基因和内参基因的融解曲线分析 | 第44-46页 |
| ·目的基因和内参基因的标准曲线 | 第46-47页 |
| ·目的基因与管家基因的原始定量结果 | 第47-50页 |
| ·目的基因与管家基因的相对定量结果 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 3 三种药剂对CMV-RNA3抑制作用 | 第52-70页 |
| ·材料与方法 | 第52-55页 |
| ·供试寄主、供试毒源及供试植物 | 第52页 |
| ·供试仪器和试剂 | 第52页 |
| ·CMV克隆 | 第52-53页 |
| ·引物合成 | 第52-53页 |
| ·半定量RT-PCR引物的合成 | 第53页 |
| ·半定量RT-PCR检测接种CMV后用三种药剂处理对CMV-RNA3复制影响 | 第53-54页 |
| ·处理及检测 | 第53-54页 |
| ·半定量RT-PCR条件的优化 | 第54页 |
| ·半定量RT-PCR检测药剂处理48h对CMV-RNA3复制的影响 | 第54页 |
| ·real time-PCR检测Bruceine D对CMV核酸复制影响 | 第54-55页 |
| ·Bruceine D对CMV基因组及亚基因组复制的影响 | 第54页 |
| ·引物合成 | 第54-55页 |
| ·RNA的反转录反应 | 第55页 |
| ·目的基因及内参基因标准曲线的建立 | 第55页 |
| ·处理及未处理样品中目的基因的相对定量 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-68页 |
| ·CMV克隆 | 第55-57页 |
| ·PCR扩增 | 第55-56页 |
| ·克隆 | 第56-57页 |
| ·测序 | 第57页 |
| ·半定量RT-PCR条件的优化 | 第57-59页 |
| ·退火温度优化 | 第57-58页 |
| ·Mg~(2+)浓度优化 | 第58-59页 |
| ·循环次数优化 | 第59页 |
| ·半定量RT-PCR检测药剂处理48h对CMV-RNA3复制的影响 | 第59-60页 |
| ·real time-PCR检测Bruceine D对CMV核酸复制影响 | 第60-68页 |
| ·目的基因和内参基因的融解曲线分析 | 第60-61页 |
| ·目的基因和内参基因的PCR扩增曲线 | 第61-63页 |
| ·目的基因和内参基因的标准曲线 | 第63-65页 |
| ·目的基因与管家基因的原始定量结果 | 第65-68页 |
| ·目的基因与管家基因的相对定量结果 | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 4 总结与讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
