基于甲病毒复制子载体的猪瘟DNA疫苗的构建及免疫效力评价
| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 1 引言 | 第16-38页 |
| ·猪瘟概述 | 第16-17页 |
| ·猪瘟病毒及其分类 | 第17页 |
| ·猪瘟病毒基因组结构 | 第17-18页 |
| ·猪瘟病毒蛋白及其功能 | 第18-21页 |
| ·病毒结构蛋白及其功能 | 第18-20页 |
| ·病毒非结构蛋白及其功能 | 第20-21页 |
| ·猪瘟疫苗研究进展 | 第21-30页 |
| ·常规疫苗 | 第21-22页 |
| ·基因工程标记疫苗 | 第22-29页 |
| ·发展方向 | 第29-30页 |
| ·甲病毒RNA复制子疫苗简介 | 第30-37页 |
| ·概念 | 第30页 |
| ·基本原理和特点 | 第30-31页 |
| ·优缺点 | 第31-32页 |
| ·免疫机理 | 第32-33页 |
| ·几种主要的甲病毒RNA复制子 | 第33-37页 |
| ·本项目研究的背景、内容及意义 | 第37-38页 |
| 2 材料和方法 | 第38-45页 |
| ·细胞 | 第38页 |
| ·质粒 | 第38-39页 |
| ·引物 | 第39页 |
| ·PCR | 第39页 |
| ·分子克隆 | 第39-41页 |
| ·质粒纯化 | 第41-42页 |
| ·猪只免疫攻毒试验 | 第42页 |
| ·阻断ELISA | 第42页 |
| ·免疫组化 | 第42页 |
| ·检测CSFV的RT-nPCR | 第42-43页 |
| ·检测CSFV的荧光定量RT-PCR | 第43页 |
| ·检测IFN-γ的荧光定量RT-PCR | 第43-45页 |
| ·外周血单个核细胞(PBMC)的分离 | 第43页 |
| ·引物及探针 | 第43页 |
| ·标准品的制备 | 第43-44页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-57页 |
| ·pSFV1CS表达载体的构建和鉴定 | 第45页 |
| ·pSFV1CS-E2表达载体的构建和鉴定 | 第45-46页 |
| ·600μg免疫3次对猪只的免疫效力 | 第46-51页 |
| ·免疫猪产生的特异性抗体 | 第46-47页 |
| ·攻毒后CSFV病毒抗原在主要脏器中的分布 | 第47-48页 |
| ·免疫猪的剖检病理变化 | 第48页 |
| ·攻毒后猪只外周血中CSFV RNA的检测结果 | 第48页 |
| ·猪只攻毒后的保护情况 | 第48-51页 |
| ·100μg免疫2次对猪只的免疫效力 | 第51-57页 |
| ·免疫猪产生的特异性抗体 | 第51页 |
| ·免疫猪只的临床和病理保护 | 第51-52页 |
| ·攻毒后CSFV抗原在主要脏器中的分布 | 第52页 |
| ·免疫猪攻毒后外周血中CSFV RNA的检测 | 第52页 |
| ·免疫猪攻毒后外周血中CSFV载量 | 第52-54页 |
| ·免疫及攻毒前后IFN-γ转录水平的变化 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-68页 |
| ·猪瘟标记疫苗(marker vaccine) | 第57页 |
| ·载体表达系统 | 第57-58页 |
| ·复制型表达载体与常规表达载体的比较 | 第58-61页 |
| ·600μg复制子疫苗接种猪只产生的免疫应答 | 第61-63页 |
| ·100μg复制子疫苗接种猪只产生的免疫应答 | 第63-65页 |
| ·接种猪只诱导产生的体液免疫应答 | 第63-64页 |
| ·接种猪只诱导产生的细胞免疫应答 | 第64-65页 |
| ·诱导的中和抗体在免疫保护中的作用 | 第65页 |
| ·跨膜区在猪瘟DNA疫苗诱导的免疫应答中的作用 | 第65-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-85页 |
| 附录 | 第85-88页 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 | 第88页 |
