| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-27页 |
| 1.基因定点修复概述 | 第11-12页 |
| ·基因定点修复基本原理 | 第11-12页 |
| ·基因定点修复具有靶向性、安全性及操作的方便性 | 第12页 |
| 2.基因定点修复研究进展 | 第12-25页 |
| ·RDO介导的嵌合体修复术 | 第12-15页 |
| ·SSO介导的基因定点修复 | 第15-17页 |
| ·从RDO分子到SSO分子 | 第15页 |
| ·SSO分子特点 | 第15-17页 |
| ·SSO作为修复载体的优越性 | 第17页 |
| ·SSO介导的基因定点修复的基本分子过程 | 第17-19页 |
| ·DNA配对是修复反应的限速步骤 | 第17-18页 |
| ·若干修复通路及功能蛋白共同参与 | 第18-19页 |
| ·SSO定点修复的分子机制 | 第19-25页 |
| ·复制在修复过程中起重要作用 | 第19-24页 |
| ·转录与基因定点修复密切相关 | 第24-25页 |
| 3.本实验设计概述 | 第25-27页 |
| 材料 | 第27-29页 |
| 1.菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.细胞系 | 第27页 |
| 3.转染试剂 | 第27页 |
| 4.寡核苷酸 | 第27-28页 |
| 5.药物 | 第28页 |
| 6.其它主要试剂及试剂盒 | 第28页 |
| 7.主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 方法 | 第29-39页 |
| 1.细胞培养 | 第30-33页 |
| ·G418溶液配制 | 第30页 |
| ·细胞生长条件 | 第30-31页 |
| ·细胞传代 | 第31页 |
| ·复苏及冻存 | 第31-32页 |
| ·复苏方法 | 第31页 |
| ·冻存方法 | 第31-32页 |
| ·台盼兰计数活细胞 | 第32页 |
| ·细胞记数法 | 第32-33页 |
| 2.Thymidine及丁酸钠溶液的配制 | 第33页 |
| 3.Lipofectamine 2000法转染DNA | 第33-34页 |
| 4.设计辅助寡核苷酸 | 第34-35页 |
| 5.辅助寡核苷酸介导的基因定点修复 | 第35-37页 |
| ·一步转染法 | 第35页 |
| ·两步转染法 | 第35-36页 |
| ·thymidine或丁酸钠作用下的两步转染法 | 第36-37页 |
| 6.Thymidine及丁酸钠作用下的基因定点修复 | 第37-38页 |
| 7.荧光显微镜下观察基因定点修复的发光细胞 | 第38页 |
| 8.FACS定量分析发光细胞比例 | 第38-39页 |
| 实验结果 | 第39-53页 |
| 1.通过辅助寡核苷酸调节基因转录提高定点修复效率 | 第39-47页 |
| ·实验一、100nt长辅助寡核苷酸 | 第39-40页 |
| ·实验二、25nt长辅助寡核苷酸 | 第40-42页 |
| ·实验三、两段25nt长辅助寡核苷酸共同参与基因定点修复 | 第42-45页 |
| ·实验四、与非转录链配对的辅助寡核苷酸参与的基因定点修复实验 | 第45-46页 |
| ·不同长度辅助寡核苷酸作用下修复效率的比较 | 第46-47页 |
| 2.利用丁酸钠活化细胞染色质结构提高定点修复效率 | 第47页 |
| 3.DNA复制、基因转录及染色质结构对于定点修复的综合作用研究 | 第47-50页 |
| ·丁酸钠与辅助寡核苷酸共同作用的定点修复 | 第47-49页 |
| ·thymidine与辅助寡核苷酸共同作用的定点修复 | 第49-50页 |
| 4.SSO分子的链偏向性分析 | 第50-53页 |
| ·辅助寡核苷酸作用下,链的偏向性分析 | 第50-51页 |
| ·丁酸钠作用下,链的偏向性分析 | 第51-53页 |
| 讨论 | 第53-68页 |
| 1.靶基因特异性转录调节促进定点修复反应 | 第53-61页 |
| ·特异性转录调节对于寡核苷酸修复的必要性 | 第53页 |
| ·以R-LOOP原理设计辅助寡核苷酸调节基因转录 | 第53-57页 |
| ·短片段辅助寡核苷酸可以提高定点修复效率 | 第57-60页 |
| ·辅助寡核苷酸参与基因定点修复实验的总结 | 第60-61页 |
| 2.基因定点修复的复制转录动态偶联 | 第61-62页 |
| 3.染色质结构变化影响定点修复过程 | 第62-64页 |
| ·染色质结构的周期性变化 | 第62-63页 |
| ·采用丁酸钠处理细胞可提高修复效率 | 第63-64页 |
| ·丁酸钠抵销了辅助寡核苷酸的部分作用 | 第64页 |
| 4.基因定点修复中SSO作用呈链的偏向性 | 第64-66页 |
| ·转录相关的链的偏向性 | 第64-65页 |
| ·复制相关的链的偏向性 | 第65-66页 |
| 5.SSO介导的基因定点修复是一个复杂的分子过程 | 第66-67页 |
| 6.本实验的优势及创新性 | 第67页 |
| 7.本实验的不足及进一步的设想 | 第67-68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 文献综述 | 第72-89页 |
| Reference | 第84-89页 |
| 英文名词及缩写 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 个人简历 | 第91-93页 |
