| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-41页 |
| 第一章 植物抗寒性及基因克隆研究进展 | 第18-41页 |
| ·植物抵抗低温胁迫机理 | 第18-20页 |
| ·冷害及其产生的机理 | 第18-19页 |
| ·冻害及其产生的机理 | 第19-20页 |
| ·冷相关蛋白的研究进展 | 第20-22页 |
| ·抗冻蛋白及其相关研究 | 第20-21页 |
| ·胚胎发育后期富集蛋白及相关研究 | 第21-22页 |
| ·植物冷诱导相关基因的研究进展 | 第22-27页 |
| ·低温响应途径的多样性和复杂性 | 第22-25页 |
| ·CBF低温响应途径中各成分和它们之间的交互作用 | 第25-26页 |
| ·IEC1:CBF3的调节因子 | 第25页 |
| ·SFR6和 HOS1 | 第25-26页 |
| ·转录阻遏物FRY2及正调节因子LOS2 | 第26页 |
| ·非温度因子调节CBFs表达 | 第26-27页 |
| ·ABA植物激素胁迫 | 第26-27页 |
| ·光信号和生物钟 | 第27页 |
| ·基因克隆方法研究进展 | 第27-33页 |
| ·图位克隆 | 第27-28页 |
| ·转座子标签法 | 第28-29页 |
| ·功能基因克隆 | 第29-30页 |
| ·差异显示 | 第30-32页 |
| ·差异显示反转录 PCR(DDRT-PCR) | 第30页 |
| ·cDNA代表性差异分析(RDA) | 第30-31页 |
| ·抑制性扣除杂交技术(SSH) | 第31-32页 |
| ·RACE技术 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-41页 |
| 第二部分 研究报告 | 第41-108页 |
| 第二章 不结球白菜抗寒相关基因BrCOR14的克隆及序列分析 | 第41-59页 |
| ·材料与方法 | 第41-50页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·菌株与质粒 | 第41-42页 |
| ·各种酶类 | 第42页 |
| ·试剂盒 | 第42页 |
| ·常用储液 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-50页 |
| ·材料的准备 | 第42页 |
| ·总RNA的提取 | 第42页 |
| ·去除总 RNA中痕量 DNA污染 | 第42-43页 |
| ·sscDNA的合成 | 第43-44页 |
| ·引物的设计 | 第44页 |
| ·PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·3'RACE | 第45-46页 |
| ·5'RACE | 第46-48页 |
| ·目的片段的回收及克隆 | 第48页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第48-49页 |
| ·序列测定及分析 | 第49页 |
| ·半定量 RT-PCR分析 | 第49页 |
| ·内标基因的选定 | 第49页 |
| ·PCR反应循环数的确定 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-55页 |
| ·不结球白菜总 RNA的提取 | 第50页 |
| ·不结球白菜BrCOR14基因cDNA全长的克隆 | 第50-53页 |
| ·不结球白菜BrCOR14基因cDNA中间片段 RT-PCR的扩增 | 第50页 |
| ·3'RACE | 第50-51页 |
| ·5'RACE | 第51页 |
| ·不结球白菜BrCOR14基因cDNA全长拼接及序列分析 | 第51-53页 |
| ·不结球白菜BrCOR14基因的同源性分析 | 第53-54页 |
| ·编码蛋白二级结构预测 | 第54页 |
| ·冷适应分析结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 主要参考文献 | 第57-59页 |
| 第三章 BrCOR14基因上游转录激活子BrCBF全长的克隆与序列分析 | 第59-73页 |
| ·材料与方法 | 第59-65页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·植物材料 | 第59页 |
| ·菌株与质粒 | 第59页 |
| ·各种酶类 | 第59页 |
| ·试剂盒 | 第59-60页 |
| ·常用储液 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-65页 |
| ·材料的准备 | 第60页 |
| ·总 RNA的提取 | 第60页 |
| ·sscDNA的合成 | 第60页 |
| ·引物的设计 | 第60页 |
| ·PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·3'RACE | 第61-62页 |
| ·5'RACE | 第62-64页 |
| ·目的片段的回收及克隆 | 第64页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第64页 |
| ·序列测定及分析 | 第64页 |
| ·半定量 RT-PCR分析方法 | 第64-65页 |
| ·内标基因的选定 | 第65页 |
| ·PCR反应循环数的确定 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-70页 |
| ·不结球白菜BrCBF基因cDNA全长的克隆 | 第65-68页 |
| ·不结球白菜BrCBF基因cDNA中间片段 RT-PCR扩增 | 第65页 |
| ·3'RACE | 第65页 |
| ·5'RACE | 第65页 |
| ·不结球白菜 BrCBF基因cDNA全长的拼接及序列分析 | 第65-68页 |
| ·不结球白菜 BrCBF基因的同源性分析 | 第68-69页 |
| ·不结球白菜 BrCBF的二级结构和三维结构分析 | 第69-70页 |
| ·冷适应分析结果 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 主要参考文献 | 第72-73页 |
| 第四章 BrCBF上游转录调节因子 BrICE的克隆及结构分析 | 第73-82页 |
| ·材料与方法 | 第73-74页 |
| ·材料 | 第73-74页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·菌株与质粒 | 第73页 |
| ·各种酶类 | 第73页 |
| ·试剂盒 | 第73页 |
| ·常用储液 | 第73-74页 |
| ·方法 | 第74页 |
| ·材料的准备 | 第74页 |
| ·总 RNA的提取 | 第74页 |
| ·sscDNA的合成 | 第74页 |
| ·引物的设计 | 第74页 |
| ·PCR扩增 | 第74页 |
| ·目的片段的回收及克隆 | 第74页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第74页 |
| ·序列测定及分析 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-80页 |
| ·不结球白菜 BrICE基因RT-PCR扩增 | 第74-75页 |
| ·不结球白菜 BrICE基因序列分析 | 第75-78页 |
| ·不结球白菜 BrICE同源性分析 | 第78-79页 |
| ·不结球白菜 BrICE二级结构和三级结构的分析 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| 主要参考文献 | 第81-82页 |
| 第五章 冷相关转录调节因子BrLOS2全长的克隆与序列分析 | 第82-96页 |
| ·材料与方法 | 第82-84页 |
| ·材料 | 第82-83页 |
| ·植物材料 | 第82页 |
| ·菌株与质粒 | 第82页 |
| ·各种酶类 | 第82-83页 |
| ·试剂盒 | 第83页 |
| ·常用储液 | 第83页 |
| ·方法 | 第83-84页 |
| ·材料的准备 | 第83页 |
| ·总 RNA的提取 | 第83页 |
| ·sscDNA的合成 | 第83页 |
| ·引物的设计 | 第83页 |
| ·PCR扩增 | 第83-84页 |
| ·3'RACE | 第84页 |
| ·5'RACE | 第84页 |
| ·目的片段的回收及克隆 | 第84页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第84页 |
| ·序列测定及分析 | 第84页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第84页 |
| ·内标基因的选定 | 第84页 |
| ·PCR反应循环数的确定 | 第84页 |
| ·结果与分析 | 第84-94页 |
| ·不结球白菜BrLOS2基因cDNA全长克隆 | 第84-89页 |
| ·不结球白菜BrLOS2基因CDNA中间片段 RT-PCR的扩增 | 第84-85页 |
| ·3'RACE | 第85页 |
| ·5'RACE | 第85页 |
| ·不结球白菜BrLOS2基因 CDNA全长拼接及序列分析 | 第85-89页 |
| ·不结球白菜 BrLOS2基因的同源性分析 | 第89-92页 |
| ·BrLOS2二级结构和三维结构的分析 | 第92-93页 |
| ·冷适应分析结果 | 第93-94页 |
| ·讨论 | 第94-95页 |
| 主要参考文献 | 第95-96页 |
| 第六章 冷胁迫相关基因植物表达载体的构建 | 第96-104页 |
| ·材料与方法 | 第96-101页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·菌株与质粒 | 第96页 |
| ·引物 | 第96页 |
| ·植物材料及培养基 | 第96-97页 |
| ·酶与试剂盒 | 第97页 |
| ·方法 | 第97-101页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304-BrCOR14的构建流程图 | 第97页 |
| ·目的基因及载体的扩增和限制性酶消化 | 第97-100页 |
| ·载体和目的基因的连接 | 第100页 |
| ·表达载体pCAMBIA1304和目的基因的鉴定 | 第100-101页 |
| ·表达载体pCAMBIA1304-目的基因转化到根癌农杆菌 LBA4404 | 第101页 |
| ·结果与分析 | 第101-103页 |
| ·基因的扩增及克隆 | 第101-102页 |
| ·基因表达载体的构建 | 第102-103页 |
| ·讨论 | 第103页 |
| 主要参考文献 | 第103-104页 |
| 第七章 全文讨论与创新之处 | 第104-108页 |
| ·讨论 | 第104-108页 |
| ·主要的低温应答基因与不结球白菜中的低温应答基因的比较 | 第105-107页 |
| ·COR基因家族 | 第105页 |
| ·CBF基因家族 | 第105-106页 |
| ·ICE基因家族 | 第106页 |
| ·LOS2基因 | 第106-107页 |
| ·低温应答基因表达的时空特异性 | 第107页 |
| ·展望 | 第107-108页 |
| ·本文创新之处 | 第108页 |
| 主要参考文献 | 第108-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第112页 |
