| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1. 引言 | 第10页 |
| 2. 生防微生物拮抗机制 | 第10-14页 |
| ·拮抗作用 | 第10页 |
| ·拮抗物质种类 | 第10-12页 |
| ·抗生素类 | 第11页 |
| ·细菌素类 | 第11页 |
| ·细胞壁降解酶类 | 第11-12页 |
| ·其他拮抗物质 | 第12页 |
| ·拮抗机理 | 第12-14页 |
| ·影响真菌细胞壁的形成 | 第12-13页 |
| ·影响真菌细胞膜的合成 | 第13页 |
| ·影响蛋白质、核酸等生物大分子合成及功能 | 第13-14页 |
| ·作用于呼吸链 | 第14页 |
| 3. 拮抗基因国内外研究现状 | 第14-16页 |
| 4. 生物信息学对拮抗基因结构与功能的分析 | 第16-17页 |
| 5. 拮抗基因研究中存在问题及研究意义 | 第17-18页 |
| 6. 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 9~#克隆子检测 | 第19-25页 |
| 1. 材料和方法 | 第19-21页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-21页 |
| ·拮抗活性检测 | 第20页 |
| ·分子检测 | 第20-21页 |
| 2. 结果与分析 | 第21-24页 |
| ·拮抗活性检测 | 第22页 |
| ·分子检测 | 第22-24页 |
| ·9~#克隆子重组pBluescriptⅡKS~+质粒DNA的提取 | 第22页 |
| ·重组质粒pBluescriptⅡKS~+的双酶切鉴定 | 第22-23页 |
| ·测序 | 第23-24页 |
| 3. 小结与讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第25-33页 |
| 1. 材料和方法 | 第25-26页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-26页 |
| 2. 结果与分析 | 第26-31页 |
| ·基因序列的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·同源性 | 第26页 |
| ·最大开放阅读框 | 第26页 |
| ·编码区密码子的偏好性 | 第26-27页 |
| ·编码蛋白质的生物信息学分析 | 第27-31页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第27页 |
| ·同源性 | 第27页 |
| ·亲疏水性 | 第27-28页 |
| ·跨膜区 | 第28页 |
| ·卷曲螺旋区 | 第28-29页 |
| ·级结构和结构域 | 第29-30页 |
| ·三级结构 | 第30-31页 |
| 3. 小结与讨论 | 第31-33页 |
| 第四章 拮抗基因的克隆及转化 | 第33-44页 |
| 1. 材料和方法 | 第33-39页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·质粒与菌株 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·9~#克隆子重组pBluescriptⅡKS~+质粒DNA的提取 | 第34页 |
| ·PCR扩增灰葡萄孢菌拮抗基因 | 第34-36页 |
| ·PCR扩增灰葡萄孢菌拮抗基因的最大ORF | 第36-37页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第37页 |
| ·重组载体的构建 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37-38页 |
| ·转化产物菌落PCR检测和双酶切检测 | 第38-39页 |
| 2. 结果与分析 | 第39-43页 |
| ·拮抗基因PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·最大ORF的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·目的基因和目的载体的双酶切 | 第41-42页 |
| ·重组载体菌落PCR检测 | 第42页 |
| ·转化产物双酶切检测 | 第42-43页 |
| 3. 小结与讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 拮抗基因在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第44-54页 |
| 1. 材料和方法 | 第44-48页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·菌株与载体 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·重组Ecoli BL21(DE_3)的诱导表达 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备及电泳 | 第46-47页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第47-48页 |
| 2. 结果与分析 | 第48-53页 |
| ·诱导表达结果 | 第48-49页 |
| ·诱导表达条件优化 | 第49-53页 |
| ·培养基的优化 | 第49-50页 |
| ·培养温度的优化 | 第50-51页 |
| ·培养时间的优化 | 第51页 |
| ·诱导时间的优化 | 第51-52页 |
| ·装液量的优化 | 第52-53页 |
| 3. 小结与讨论 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 展望 | 第55-56页 |
| 本研究的创新点 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第62-63页 |
| 在学期间参加的学术会议及其他 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
