| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 综述 | 第13-43页 |
| 材料与方法 | 第43-66页 |
| 1 电生理实验探索与方法建立 | 第43-46页 |
| ·膜电位的测定方法 | 第43页 |
| ·细胞内硝态氮的测定 | 第43-46页 |
| ·硝酸盐敏感剂的配制 | 第43页 |
| ·双阻微电极的制作 | 第43-44页 |
| ·双孔硝酸盐选择性电极的制备 | 第44页 |
| ·双阻离子选择性微电极方法活体测定细胞内硝酸盐活度原理 | 第44-45页 |
| ·水稻根系细胞和叶片细胞硝酸盐的测定 | 第45-46页 |
| 2 硝态氮对水稻的生长的调节与影响的试验 | 第46-47页 |
| ·试验材料 | 第46-47页 |
| ·生物量测定 | 第47页 |
| ·叶片根系NO_3~-的测定 | 第47页 |
| ·叶片根系NRA的测定 | 第47页 |
| ·叶片根系GSA的测定 | 第47页 |
| 3 水稻吸收硝态氮动力学试验 | 第47-56页 |
| ·试验材料 | 第48页 |
| ·硝态氮的净吸收实验 | 第48页 |
| ·不同水稻品种根系表皮细胞对硝态氮处理的敏感性 | 第48-49页 |
| ·硝态氮的内流实验 | 第49页 |
| ·硝酸盐运输蛋白基因时空表达: | 第49-56页 |
| ·采样时期 | 第49页 |
| ·Semi-quantitative RT-PCR分析OsNRT基因的表达 | 第49-51页 |
| ·Realtime PCR | 第51-56页 |
| 4 高亲和硝酸盐运输蛋白基因的功能验证 | 第56-63页 |
| ·OsNAR2.1全长基因的获得 | 第56-57页 |
| ·利用蛙卵异源表达系统分析高亲和硝酸盐运输蛋白基因的功能特征 | 第57-63页 |
| ·蛙卵表达系统的构建 | 第58页 |
| ·cRNA的体外合成 | 第58-59页 |
| ·蛙卵的获得 | 第59-61页 |
| ·cRNA的微注射 | 第61-62页 |
| ·细胞的培养 | 第62页 |
| ·验证 | 第62-63页 |
| ·微电极法测定蛙卵中细胞质pH | 第63页 |
| ·pH敏感剂 | 第63页 |
| ·pH电极的制作与标定 | 第63页 |
| ·测定蛙卵细胞质pH | 第63页 |
| 5 水稻细胞内硝态氮对环境处理的变化 | 第63-66页 |
| ·实验处理 | 第63-64页 |
| ·硝酸盐选择性电极测定细胞质和液泡硝酸盐 | 第64页 |
| ·木质部伤流液的收集及伤流液硝态氮的测定 | 第64页 |
| ·NRA测定 | 第64页 |
| ·Semi-quantitative RT-PCR分析OsNia1和OsNia2表达 | 第64-66页 |
| 结果与讨论 | 第66-158页 |
| 1 双阻离子选择性微电极测定活体水稻细胞中硝酸盐的活度 | 第66-72页 |
| ·硝酸盐感受膜的对硝酸盐感应标准曲线 | 第67-68页 |
| ·测定水稻细胞硝酸盐的活度 | 第68-69页 |
| 讨论 | 第69-72页 |
| 2 不同水稻品种的在硝态氮培养条件下生长差异 | 第72-77页 |
| ·四个水稻品种的生长差异 | 第72页 |
| ·水稻硝态氮浓度与总氮含量 | 第72-73页 |
| ·NRA | 第73-74页 |
| ·GS活性 | 第74页 |
| 讨论 | 第74-77页 |
| 3 不同水稻品种对硝态氮的吸收差异 | 第77-99页 |
| ·硝态氮的内流 | 第77-79页 |
| ·硝态氮净吸收动力学 | 第79-81页 |
| ·OsNRT1.1和OsNRT2s在不同水稻中的表达模式 | 第81-91页 |
| 讨论 | 第91-99页 |
| 4 OsNRT2基因的结构与功能分析 | 第99-149页 |
| ·水稻硝酸盐高亲和运输蛋白的基因序列分析 | 第99页 |
| ·水稻硝酸盐高亲和运输蛋白的氨基酸序列分析 | 第99-101页 |
| ·水稻硝酸盐高亲和运输蛋白的跨膜拓扑模型分析 | 第101-102页 |
| ·水稻硝酸盐运输蛋白在蛙卵中的表达及功能验证 | 第102-112页 |
| 讨论 | 第112-149页 |
| 5 水稻液泡硝态氮再利用 | 第149-158页 |
| ·不同硝态氮条件下水稻中细胞硝酸盐活度变化 | 第149-150页 |
| ·氮饥饿时水稻液泡中硝态氮的再调动 | 第150-151页 |
| ·饥饿条件下根系细胞质硝酸盐的反应 | 第151页 |
| ·氮饥饿时木质部伤流中硝态氮的变化 | 第151-153页 |
| ·氮素饥饿条件下NRA变化 | 第153-154页 |
| ·OsNia1和OsNia2的表达 | 第154页 |
| 讨论 | 第154-158页 |
| 全文结论 | 第158-159页 |
| 创新之处 | 第159-160页 |
| 发表文章 | 第160-161页 |
| 致谢 | 第161页 |
