| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| ·人生长激素概况 | 第11-14页 |
| ·人生长激素的生物化学 | 第11-12页 |
| ·人生长激素的生理作用 | 第12-14页 |
| ·生长素分泌的调节机制 | 第14页 |
| ·生长激素在临床上的应用 | 第14页 |
| ·生长激素释放激素概况 | 第14-16页 |
| ·生长激素释放激素的研究历史 | 第14-15页 |
| ·GHRH的一级结构与活性的关系 | 第15页 |
| ·GHRH的生理作用 | 第15页 |
| ·GHRH的作用机理 | 第15-16页 |
| ·人血清白蛋白概况 | 第16-18页 |
| ·人血清白蛋白的结构组成 | 第17页 |
| ·人血清白蛋白的生物功能 | 第17-18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母概况 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-32页 |
| ·材料 | 第20-24页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·质粒 | 第20页 |
| ·白蛋白基因片段 | 第20页 |
| ·蛋白标准品 | 第20页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第20页 |
| ·试剂盒 | 第20-21页 |
| ·核酸及蛋白分子量标准 | 第21页 |
| ·引物序列 | 第21页 |
| ·主要仪器和层析柱 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要培养基 | 第22-23页 |
| ·主要溶液 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-32页 |
| ·GHRH基因的获得 | 第24-25页 |
| ·HSA-GHRH基因的获得 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pPIC9-HSA-GHRH的构建 | 第26-27页 |
| ·重组质粒pPIC9-HSA-GHRH的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒pPIC9-HSA-GHRH转化子的筛选 | 第27-28页 |
| ·巴斯德毕赤酵母菌的电转化 | 第28-29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母转化子的筛选 | 第29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母转化子在摇瓶里的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·外标法测定HSA-GHRH在培养上清的表达水平 | 第30页 |
| ·HSA-GHRH的纯化 | 第30页 |
| ·HSA-GHRH的纯度分析 | 第30页 |
| ·重组蛋白理化性质的鉴定 | 第30-31页 |
| ·HSA-GHRH的活性测定 | 第31-32页 |
| 第三章 结果 | 第32-47页 |
| ·GHRH基因的获得 | 第32页 |
| ·HSA-GHRH基因的获得 | 第32-40页 |
| ·重组质粒pPIC9-HSA-GHRH的构建 | 第40-42页 |
| ·表达载体pPIC9-HSA-GHRH的鉴定 | 第42页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的转化及转化子的筛选 | 第42-43页 |
| ·pPIC9-HSA-GHRH/GS115工程菌株表达克隆的筛选 | 第42-43页 |
| ·用蛋白外标法确定培养上清中HSA-GHRH的表达水平 | 第43-44页 |
| ·表达载体pPIC9-HSA-GHRH/GS115工程菌株的摇瓶培养 | 第44页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白理化性质的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白N端氨基酸序列的测定 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白生物活性测定 | 第46-47页 |
| ·体内活性的测定 | 第46页 |
| ·长效性的初步测定 | 第46-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-50页 |
| ·几种延长蛋白药物半衰期方法的比较 | 第47-48页 |
| ·聚乙二醇修饰的优势 | 第47页 |
| ·聚乙二醇修饰的局限性 | 第47-48页 |
| ·白蛋白融合蛋白的优势 | 第48页 |
| ·目的基因的拼接 | 第48-49页 |
| ·巴斯德毕赤酵母菌的转化方法 | 第49-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 第六章 参考文献 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
