| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| ·PED概述 | 第14-16页 |
| ·流行病学 | 第14页 |
| ·临床症状 | 第14页 |
| ·发病机理 | 第14-15页 |
| ·病理变化 | 第15页 |
| ·诊断 | 第15页 |
| ·组织嗜性和免疫机制 | 第15-16页 |
| ·免疫防治措施 | 第16页 |
| ·PEDV的生物学特性 | 第16-18页 |
| ·PEDV的形态结构 | 第16页 |
| ·PEDV理化特性 | 第16-17页 |
| ·PEDV抗原性 | 第17页 |
| ·PEDV病毒学分类地位 | 第17页 |
| ·PEDV的基因组结构 | 第17页 |
| ·PEDV基因组编码蛋白及其功能 | 第17-18页 |
| ·冠状病毒N蛋白亚细胞定位特征的研究进展 | 第18-21页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒N蛋白亚细胞定位信号的鉴定 | 第22-38页 |
| ·材料与方法 | 第22-28页 |
| ·菌种、细胞株及质粒 | 第22-23页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第23页 |
| ·亚细胞定位信号的预测 | 第23页 |
| ·短肽及引物设计 | 第23页 |
| ·N基因的截短扩增 | 第23-25页 |
| ·小片段的合成 | 第25页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第25页 |
| ·PCR产物和pAcGFP-C1 载体的酶切及纯化回收 | 第25-26页 |
| ·连接与转化 | 第26页 |
| ·真核表达重组质粒的鉴定及序列测定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的大量制备与分析 | 第27页 |
| ·转染和DAPI染核 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-37页 |
| ·亚细胞定位信号的预测结果 | 第28页 |
| ·不同基因片段的扩增 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第29页 |
| ·激光共聚焦显微镜分析结果 | 第29-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 PEDV N蛋白与Vero E6 核仁蛋白Fibrillarin的亚细胞定位分析 | 第38-45页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·质粒、菌种和细胞株 | 第38页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第38-39页 |
| ·Fibrillarin基因引物的设计 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·Vero E6 细胞的培养及RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·Fibrillarin基因反转录 | 第40页 |
| ·Fibrillarin基因的扩增与真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的转染 | 第41页 |
| ·Western blot分析 | 第41页 |
| ·共聚焦分析 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-43页 |
| ·Fibrillarin基因的获得 | 第41页 |
| ·重组阳性质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白的表达检测 | 第42页 |
| ·N蛋白和Fibrillarin蛋白的亚细胞定位特征分析 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 猪流行性腹泻病毒对Vero E6 细胞核蛋白B23.1 的影响 | 第45-50页 |
| ·材料和方法 | 第45-46页 |
| ·质粒、病毒和细胞株 | 第45页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第45-46页 |
| ·细胞培养 | 第46页 |
| ·重组质粒的大量制备与分析 | 第46页 |
| ·转染和病毒接种 | 第46页 |
| ·病毒感染细胞间接免疫试验和DAPI染核 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-47页 |
| ·激光共聚焦显微镜分析在没有PEDV感染情况下B23.1 蛋白在 12、18和24h时的分布变化 | 第46-47页 |
| ·激光共聚焦显微镜分析感染PEDV的情况下B23.1 蛋白在 12、18 和 24h时的分布变化 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 第五章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
