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中国葡萄属野生种抗白粉病基因原核表达与抗体制备

第一章 问题提出及前人研究进展第1-23页
   ·芪合成酶相关研究进展第11-13页
     ·芪合成酶(STS)的酶学性质第11-12页
     ·芪合成酶基因的研究第12页
     ·芪合成酶(STS)的产物白藜芦醇研究进展第12-13页
   ·乙醛脱氢酶基因研究进展第13-14页
   ·基因体外表达技术研究进展第14-17页
     ·基因体外表达技术的应用第14页
     ·基因体外表达系统第14-17页
       ·大肠杆菌表达系统第14-16页
       ·酵母表达系统第16-17页
       ·昆虫细胞表达系统第17页
       ·哺乳动物细胞表达系统第17页
   ·重组蛋白包涵体复性研究进展第17-20页
     ·包涵体的形成机制第17-18页
     ·包涵体的复性方法研究进展第18-20页
   ·抗体技术在植物研究中的应用第20-22页
     ·抗体技术应用于植物体内目标成分的精细定位第21页
     ·抗体技术用于转基因植物的检测第21-22页
     ·抗体技术用于植物抗病感病检测第22页
   ·本研究的目的及意义第22-23页
第二章 材料与方法第23-34页
   ·实验材料第23页
     ·主要试剂第23页
     ·PCR 模板与引物第23页
     ·主要仪器第23页
   ·实验方法第23-34页
     ·芪合成酶基因cDNA 全长序列的PCR 扩增第23-24页
     ·目的基因DNA 片段的回收和克隆第24-27页
       ·目的基因DNA 片段的回收第24页
       ·回收片段与克隆载体(pGEM-T-easy)的连接反应第24页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备与连接产物的转化第24-26页
       ·重组质粒的筛选与鉴定第26页
       ·重组质粒的酶切鉴定第26-27页
     ·原核表达载体构建第27页
       ·目标片段的回收第27页
       ·目的基因与pGEX-4T-1 载体的连接及转化第27页
       ·重组原核表达载体酶切鉴定第27页
     ·芪合成酶基因和乙醛脱氢酶基因在大肠杆菌中的诱导融合表达第27-29页
     ·芪合成酶融合蛋白包涵体复性,纯化第29-30页
       ·目的融合蛋白可溶性检测第29页
       ·包涵体的变复性实验与目的融合蛋白的纯化第29-30页
     ·芪合成酶融合蛋白多克隆抗体的制备第30-32页
       ·芪合成酶融合蛋白表达产量的测定第30-31页
       ·免疫实验及多克隆抗血清的获得第31-32页
     ·芪合成酶融合蛋白多克隆抗体的Western blot 检测第32-34页
第三章 结果与分析第34-42页
   ·中国野生葡萄芪合成酶基因和乙醛脱氢酶基因的体外扩增第34-36页
     ·乙醛脱氢酶基因和芪合成酶基因的PCR 扩增第34页
     ·乙醛脱氢酶基因和芪合成酶基因的克隆和测序第34-36页
   ·芪合成酶基因和醛脱氢酶基因在大肠杆菌中的诱导融和表达第36-39页
   ·芪合成酶融合蛋白包涵体复性与纯化第39页
   ·目的蛋白多克隆抗血清制备第39-42页
     ·目的蛋白包涵体产量的测定第39-40页
     ·抗原的制备第40-41页
     ·多克隆抗血清的Western blot 检测第41-42页
第四章 讨论第42-44页
   ·乙醛脱氢酶基因和芪合成酶基因的原核表达第42页
   ·芪合成酶融合蛋白的复性第42-43页
   ·多克隆抗血清的制备第43-44页
第五章 结论第44-45页
参考文献第45-51页
附录第51-53页
致谢第53-54页
作者简介第54页

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