| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 1． 实验材料 | 第10-13页 |
| 1．1 材料和试剂 | 第10-13页 |
| 1．1．1 材料 | 第10页 |
| 1．1．2 主要试剂与酶类 | 第10页 |
| 1．1．3 菌株和质粒 | 第10-11页 |
| 1．1．4 常用缓冲溶液和培养基的配制 | 第11-12页 |
| 1．1．5 主要仪器设备 | 第12-13页 |
| 1．1．6 使用的主要生物信息数据库和计算机软件 | 第13页 |
| 2． 实验方法 | 第13-22页 |
| 2．1 肝组织处理 | 第13页 |
| 2．2 总RNA的提取 | 第13页 |
| 2．3 金丝猴 IGF-I开读框序列的克隆 | 第13-17页 |
| 2．3．1 PCR引物的设计 | 第13-14页 |
| 2．3．2 RT-PCR | 第14-15页 |
| 2．3．2．1 第一链cDNA的合成 | 第14-15页 |
| 2．3．2．2 PCR反应 | 第15页 |
| 2．3．3 PCR产物的克隆 | 第15-16页 |
| 2．3．3．1 JM109高效感受态制备 | 第15页 |
| 2．3．3．2 PCR产物的回收 | 第15-16页 |
| 2．3．3．3 PCR产物和pGEM-T Easy载体的连接 | 第16页 |
| 2．3．3．4 连接产物的转化 | 第16页 |
| 2．3．4 重组质粒的PCR鉴定 | 第16-17页 |
| 2．3．5 重组子的序列测定 | 第17页 |
| 2．3．6 计算机序列分析 | 第17页 |
| 2．3．7 克隆序列的GenBank登录 | 第17页 |
| 2．4 IGF-I基因在大肠杆菌中的表达 | 第17-22页 |
| 2．4．1 原核表达载体的构建 | 第17-20页 |
| 2．4．1．1 引物设计 | 第17-18页 |
| 2．4．1．2 TOP10F与BL21(DE3) PlSs感受态细胞的制备 | 第18页 |
| 2．4．1．3 重组质粒pGEM-IGF-I的提取 | 第18-19页 |
| 2．4．1．4 pET-DsbA质粒的大量提取及纯化 | 第19-20页 |
| 2．4．2 金丝猴 IGF-I基因原核表达载体的构建 | 第20页 |
| 2．4．3 金丝猴 IGF-I基因在 BL21中的诱导表达 | 第20-21页 |
| 2．4．3．1 融合蛋白的表达和样品的制备 | 第20-21页 |
| 2．4．3．2 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第21页 |
| 2．4．4 表达蛋白的可溶性分析 | 第21-22页 |
| 3 结果 | 第22-30页 |
| 3．1 总RNA的分离 | 第22页 |
| 3．2 金丝猴IGF-I编码区序列的克隆 | 第22-25页 |
| 3．2．1 PCR鉴定 | 第22页 |
| 3．2．2 测序分析 | 第22-25页 |
| 3．2．3 同源性比较分析 | 第25页 |
| 3．3 IGF-I基因在大肠杆菌中的表达 | 第25-30页 |
| 3．3．1 原核表达载体pET-IGF-I的鉴定 | 第25-29页 |
| 3．3．2 表达产物的电泳分析 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-33页 |
| 5 展望 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-36页 |
| 文献综述 | 第36-52页 |
| 综述 胰岛素样生长因子I(IGF-I)的研究进展 | 第36-52页 |
| 1． 概述 | 第36页 |
| 2 IGF-I的性质与特点 | 第36-38页 |
| 3 IGF-I的生理功能 | 第38-42页 |
| 3．1 IGF-I与生长发育 | 第38-39页 |
| 3．2 IGF-1与代谢作用 | 第39-40页 |
| 3．2．1 IGF-1与蛋白代谢 | 第39页 |
| 3．2．2 IGF-1与脂代谢 | 第39-40页 |
| 3．3 IGF-1的免疫调节作用 | 第40-41页 |
| 3．3．1 调节Tc的生长、分化和效应完成 | 第40-41页 |
| 3．3．2 促进淋巴组织增生 | 第41页 |
| 3．3．3 刺激淋巴细胞的趋化 | 第41页 |
| 3．4 IGF-1与细胞凋亡 | 第41页 |
| 3．5 IGF-1与中枢神经系统 | 第41-42页 |
| 4 IGF-1在实际中的应用 | 第42-45页 |
| 4．1 IGF-1的免反调节作用在自身免疫性糖尿病中的应用 | 第42-43页 |
| 4．2 胰岛素对I型糖尿病的预治作用 | 第43页 |
| 4．3 IGF-1在中枢神经系统损伤中的应用 | 第43-44页 |
| 4．4 IGF-1对GH不敏感所致矮小症的治疗 | 第44-45页 |
| 4．5 IGF-1对急性肾损伤和慢性肾脏疾病的作用 | 第45页 |
| 5 IGF-1应用的潜在危险 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 在读期间科研成果简介 | 第53-54页 |
| 声明 | 第54页 |
