| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述和实验设计方案 | 第12-47页 |
| 第一章 霍乱毒素B亚单位的研究进展 | 第13-21页 |
| ·霍乱弧菌(V.cholerae)和霍乱毒素 | 第13-14页 |
| ·霍乱弧菌 | 第13页 |
| ·霍乱毒素 | 第13-14页 |
| ·霍乱毒素B亚单位的基因表达 | 第14-15页 |
| ·霍乱毒素B亚单位的应用 | 第15-17页 |
| ·载体蛋白 | 第15页 |
| ·免疫佐剂 | 第15-16页 |
| ·口服及鼻内免疫蛋白 | 第16页 |
| ·CTB与免疫原的不同使用方法和免疫途径对其免疫作用的影响 | 第16-17页 |
| ·霍乱毒素B亚单位的研究进展 | 第17-21页 |
| ·融合表达研究 | 第17-18页 |
| ·口服免疫研究 | 第18-19页 |
| ·鼻内免疫研究 | 第19-21页 |
| 第二章 Expansin—细胞壁松弛蛋白 | 第21-31页 |
| ·Expansin家族 | 第21-22页 |
| ·Expansin的功能 | 第22-27页 |
| ·植株营养生长 | 第23-24页 |
| ·根系生长 | 第24页 |
| ·种子发育和萌发 | 第24-25页 |
| ·果实成熟软化 | 第25-26页 |
| ·授粉受精 | 第26页 |
| ·其他功能 | 第26-27页 |
| ·其他生物类expansin研究 | 第27页 |
| ·Expansin的蛋白结构和作用机制 | 第27-29页 |
| ·研究展望 | 第29-31页 |
| 第三章 杆状病毒表达载体系统 | 第31-42页 |
| ·杆状病毒的分类 | 第31-32页 |
| ·杆状病毒的生活史 | 第32页 |
| ·杆状病毒的基因及其功能 | 第32-33页 |
| ·编码多角体相关蛋白质的基因 | 第32-33页 |
| ·编码病毒体结构蛋白基因 | 第33页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统的基本原理 | 第33-36页 |
| ·杆状病毒载体表达系统的改进 | 第36-38页 |
| ·重组病毒筛选方法的改进 | 第36页 |
| ·提高病毒重组效率方面的改进 | 第36-38页 |
| ·杆状病毒表达载体的改进 | 第38页 |
| ·杆状病毒载体表达系统的特点 | 第38-39页 |
| ·杆状病毒表达系统的优点 | 第38-39页 |
| ·家蚕/BmNPV系统相对于sf细胞/AcNPV系统的优势 | 第39页 |
| ·杆状病毒表达系统存在的缺陷 | 第39页 |
| ·杆状病毒表达载体系统表达水平的影响因素 | 第39-41页 |
| ·细胞类型与质量 | 第40页 |
| ·外源蛋白的性质 | 第40页 |
| ·启动子序列的完整性与类型 | 第40页 |
| ·融合蛋白 | 第40-41页 |
| ·在昆虫细胞内表达与幼虫体内表达 | 第41页 |
| ·其它因素 | 第41页 |
| ·结语 | 第41-42页 |
| 第四章 实验设计方案 | 第42-47页 |
| ·实验的目的和意义 | 第42-43页 |
| ·霍乱毒素B亚基在家蚕杆状病毒表达系统的表达与活性分析 | 第42页 |
| ·小麦小孢子特异表达β-expansin基因TaEXPB2的克隆与表达 | 第42-43页 |
| ·研究的主要内容 | 第43-45页 |
| ·霍乱毒素B亚基在家蚕杆状病毒表达系统的表达与活性分析 | 第43页 |
| ·小麦小孢子特异表达β-expansin基因TaEXPB2的克隆与表达 | 第43-45页 |
| ·实验流程图 | 第45-47页 |
| ·霍乱毒素B亚基在家蚕杆状病毒表达系统的表达与活性分析 | 第45-46页 |
| ·小麦小孢子特异表达β-expansin基因TaEXPB2的克隆与表达 | 第46-47页 |
| 第二部分 霍乱毒素B亚基在家蚕杆状病毒表达系统的表达与活性分析 | 第47-83页 |
| 第五章 家蚕杆状病毒重组转移载体的构建 | 第49-59页 |
| ·材料和试剂 | 第49-51页 |
| ·实验方法 | 第51-55页 |
| ·引物的设计和PCR | 第51-52页 |
| ·低熔点胶回收目的片段 | 第52-53页 |
| ·质粒抽提： | 第53页 |
| ·核酸电泳 | 第53页 |
| ·酶切反应 | 第53-54页 |
| ·连接反应 | 第54页 |
| ·E.coli TG1感受态细胞的制备 | 第54页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第54页 |
| ·重组转移载体的鉴定 | 第54-55页 |
| ·结果和分析 | 第55-58页 |
| ·序列测定 | 第55-56页 |
| ·重组转移载体pBacPAK8-mCTB的构建 | 第56-57页 |
| ·重组转移载体pBacPAK-mCTB的鉴定 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 重组家蚕杆状病毒的筛选和鉴定 | 第59-70页 |
| ·材料和试剂 | 第59-61页 |
| ·实验方法 | 第61-66页 |
| ·细胞培养、冻存与复苏 | 第61页 |
| ·病毒培养 | 第61页 |
| ·病毒滴度测定 | 第61页 |
| ·Bm-BacPAK6 DNA的提取及酶切线性化 | 第61-62页 |
| ·重组转移载体质粒与线性化病毒DNA共转染 | 第62-63页 |
| ·重组病毒的筛选 | 第63页 |
| ·重组病毒的DNA Southern杂交鉴定 | 第63-66页 |
| ·重组病毒的PCR鉴定 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-70页 |
| ·共转染及重组病毒的筛选 | 第66-67页 |
| ·PCR鉴定 | 第67-68页 |
| ·Southern杂交鉴定 | 第68页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第68-70页 |
| 第七章 霍乱毒素B亚基在家蚕及小鼠中的表达及活性分析 | 第70-83页 |
| ·材料和试剂 | 第70-73页 |
| ·实验方法 | 第73-75页 |
| ·重组病毒在家蚕细胞和五龄幼虫中的表达 | 第73页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第73页 |
| ·表达产物的ELISA检测 | 第73-74页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第74-75页 |
| ·动物免疫增强实验 | 第75页 |
| ·结果和分析 | 第75-81页 |
| ·表达产物的ELISA检测 | 第75-77页 |
| ·表达产物的GM1-ELISA活性检测 | 第77页 |
| ·表达产物的蛋白质电泳与Western blotting分析 | 第77-80页 |
| ·重组CTB蛋白对增强Ⅰ型糖尿病口服耐受分析 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| 第三部分 小麦小孢子特异表达的β-expansin基因TaEXPB2的获得与鉴定 | 第83-103页 |
| 第八章 小麦小孢子特异表达β-expansin基因TaEXPB2的获得与鉴定 | 第85-91页 |
| ·材料和试剂 | 第85-86页 |
| ·实验方法 | 第86-87页 |
| ·RNA和基因组DNA分离 | 第86页 |
| ·RT-PCR分析 | 第86页 |
| ·Northern blotting分析 | 第86-87页 |
| ·Southern blotting分析 | 第87页 |
| ·特异TaEXPB2基因克隆入载体pCR2.1 | 第87页 |
| ·测序 | 第87页 |
| ·同源性及蛋白预测分析 | 第87页 |
| ·结果和分析 | 第87-90页 |
| ·TaEXPB2基因序列 | 第87-88页 |
| ·RT-PCR分析 | 第88-89页 |
| ·TaEXPB2基因的体内表达模式分析 | 第89页 |
| ·Southern杂交分析 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| 第九章 TaEXPB2基因的原核表达、纯化及检测 | 第91-97页 |
| ·材料和试剂 | 第91-92页 |
| ·实验方法 | 第92-94页 |
| ·引物的设计和PCR | 第92页 |
| ·基因转入表达载体 | 第92页 |
| ·重组质粒的GST诱导表达及样品处理 | 第92-93页 |
| ·表达的重组蛋白的纯化 | 第93页 |
| ·兔源TaEXPB2抗体的制备 | 第93-94页 |
| ·兔源TaEXPB2多克隆抗体的ELISA检测效价 | 第94页 |
| ·表达的融合蛋白的Western blotting分析 | 第94页 |
| ·结果和分析 | 第94-97页 |
| ·重组质粒pGEX-TaEXPB2的构建策略 | 第94-95页 |
| ·重组质粒pGEX-TaEXPB2的鉴定 | 第95页 |
| ·表达的重组蛋白的蛋白质电泳及纯化 | 第95-96页 |
| ·TaEXPB2特异多肽的设计和合成及多克隆抗体的制备 | 第96页 |
| ·重组蛋白的Western杂交分析 | 第96-97页 |
| 第十章 TaEXPB2基因在家蚕杆状病毒载体系统中的表达与鉴定 | 第97-103页 |
| ·材料和试剂 | 第97页 |
| ·实验方法 | 第97页 |
| ·引物的设计和PCR | 第97页 |
| ·外源基因在家蚕杆状病毒载体系统中的表达 | 第97页 |
| ·结果和分析 | 第97-101页 |
| ·TaEXPB2基因的序列测定 | 第97-98页 |
| ·重组转移载体pBacPAK8-TaEXPB2的构建策略 | 第98-99页 |
| ·重组转移载体pBacPAK-TaEXPB2的鉴定 | 第99-100页 |
| ·共转染及重组病毒的筛选 | 第100页 |
| ·重组病毒的PCR鉴定 | 第100-101页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第101页 |
| ·重组病毒的其他鉴定 | 第101页 |
| ·讨论 | 第101-103页 |
| 总结 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
