| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| ·链霉菌简介 | 第10-11页 |
| ·链霉菌的模式菌株天蓝色链霉菌A3(2) | 第11页 |
| ·阿维链霉菌简介 | 第11-13页 |
| ·阿维菌素合成基因簇 | 第12-13页 |
| ·阿维链霉MA-4680的测序 | 第13页 |
| ·吸水链霉菌5008简介 | 第13-14页 |
| ·变铅青链霉菌简介 | 第14-15页 |
| ·抗生素合成基因簇 | 第15页 |
| ·抗生素合成的调控 | 第15-18页 |
| ·途径专一性调控 | 第15-16页 |
| ·抗生素合成的全局调控 | 第16-17页 |
| ·双组份调控 | 第17-18页 |
| ·本研究的工作基础、目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-33页 |
| ·材料 | 第19-25页 |
| ·菌株 | 第19-20页 |
| ·质粒 | 第20-22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·培养基和生化试剂 | 第22-24页 |
| ·抗生素的使用浓度 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-33页 |
| ·链霉菌培养及菌种保藏 | 第25页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量提取 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌和链霉菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第26页 |
| ·链霉菌总DNA的提取 | 第26页 |
| ·质粒从大肠杆菌向链霉菌的两亲本接合转移 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)及转化 | 第27页 |
| ·Southern Blot(DIG杂交) | 第27-28页 |
| ·DNA片段凝胶回收 | 第28-29页 |
| ·梯度平板法测定链霉菌的抗生素天然抗性水平 | 第29-30页 |
| ·AT克隆 | 第30页 |
| ·PCR | 第30-31页 |
| ·PCR-Targeting技术中E.coli电转化感受态的制备及电转化 | 第31-32页 |
| ·阿维菌素的HPLC测定 | 第32-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-69页 |
| ·多种链霉菌中nsdA同源基因的检测 | 第33-35页 |
| ·Southern杂交验证nsdA基因存在于多种链霉菌中 | 第33-34页 |
| ·PCR验证nsdA存在多种链霉菌中 | 第34-35页 |
| ·变铅青链霉菌中nsdA基因的中断激活沉默抗生素的合成 | 第35-44页 |
| ·变铅青链霉菌ZX64中nsdA基因的PCR扩增及其序列测定 | 第35-36页 |
| ·nsdA基因的中断 | 第36-42页 |
| ·基因中断和基因置换的基本原理 | 第36-37页 |
| ·基因中断质粒pHL201的构建 | 第37-38页 |
| ·变铅青链霉菌ZX64中nsdA基因中断菌株的筛选 | 第38-39页 |
| ·nsdA基因中断的PCR验证 | 第39-42页 |
| ·nsdA基因中断对沉默放线紫红素基因的激活作用 | 第42-44页 |
| ·阿维链霉菌NRRL8165中nsdA同源基因的克隆及其应用 | 第44-60页 |
| ·阿维链霉菌NRRL8165中nsdA_(av)的克隆 | 第44-47页 |
| ·PCR引物的设计 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增nsdA_(av)基因 | 第45-46页 |
| ·5.7kbPCR产物的AT克隆及其序列分析 | 第46-47页 |
| ·阿维链霉菌NRRL8165中nsdA_(av)的基因中断 | 第47-56页 |
| ·抗生素天然抗性水平 | 第47-48页 |
| ·基因中断质粒的构建 | 第48-53页 |
| ·染色体上nsdA_(av)的基因中断 | 第53-54页 |
| ·nsdA_(av)基因中断的PCR验证 | 第54-56页 |
| ·基因中断菌株发酵产物的HPLC分析 | 第56-60页 |
| ·吸水链霉菌5008中nsdA_(jg)基因的克隆 | 第60-69页 |
| ·吸水链霉菌5008中nsdA_(jg)的克隆 | 第60-62页 |
| ·PCR引物的设计 | 第60页 |
| ·PCR扩增nsdA_(jg)基因 | 第60-62页 |
| ·nsdA_(jg)的序列分析 | 第62-63页 |
| ·吸水链霉菌5008菌株中nsdA_(jg)的中断 | 第63-66页 |
| ·抗生素天然抗性水平 | 第63页 |
| ·基因中断质粒的构建 | 第63-66页 |
| ·大肠杆菌-吸水链霉菌5008属间接合转移系统探索 | 第66-69页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第69-72页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
