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酿酒葡萄遗传转化体系的建立及抗病基因双价表达载体的构建

中文摘要第1-11页
英文摘要第11-14页
第一章 综述第14-49页
 引言第14-15页
   ·葡萄再生系统的研究进展第15-30页
     ·葡萄再生系统类型第16-18页
       ·器官再生系统第16-17页
       ·体细胞胚再生系统第17-18页
     ·葡萄再生系统的建立第18-25页
       ·原生质体培养与细胞融合第18-19页
       ·胚培养育种第19页
       ·胚株再生培养第19页
       ·花药、花丝培养第19-21页
       ·叶片、叶柄、卷须再生培养第21-25页
     ·葡萄离体微繁技术的研究第25-28页
       ·外植体的选择和消毒第25-26页
       ·外植体的的增殖第26页
       ·生根第26-27页
       ·移栽第27-28页
     ·影响葡萄高效离体再生系统建立的因素第28-30页
       ·外植体基因型的影响第28页
       ·外植体生理状态的影响第28-29页
       ·培养基和植物生长调节物质的影响第29-30页
   ·葡萄基因工程研究进展第30-41页
     ·葡萄遗传转化途径第31-33页
       ·根癌农杆菌介导的遗传转化第31-33页
       ·基因枪法第33页
       ·果树基因转化系统的选择第33页
     ·影响葡萄基因转化的主要因素第33-38页
       ·农杆菌有效转化靶组织的能力第34-35页
       ·对转化细胞的有效筛选和检测第35-37页
       ·葡萄基因转化受体系统的建立第37-38页
     ·果树基因工程应用展望第38-41页
       ·利用多基因转化培育抗病虫害新品种第38-39页
       ·利用基因工程培育砧木新品种第39页
       ·提高抗霜冻性第39-40页
       ·调节果实的成熟及改良水果的品质第40-41页
   ·抗植物真菌病害基因及其应用.....................................................................第41-47页
     ·抗真菌蛋白第42-45页
       ·几丁质酶(Chi)基因及其应用第43-44页
       ·β-1、3-葡聚糖酶(Glu)基因及其应用第44-45页
       ·萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFPs)基因及其应用第45页
     ·植物抗毒素基因及其应用..............................................................................第45-46页
     ·其它抗病基因及其应用第46-47页
       ·核糖体灭活蛋白基因及其应用第46页
       ·过氧化物酶基因及其应用...........................................................................第46-47页
       ·病原真菌酶的抑制蛋白第47页
       ·抗真菌毒素第47页
   ·研究的目的意义、创新之处第47-49页
第二章 酿酒葡萄再生体系的建立第49-71页
   ·材料与方法第49-52页
     ·材料第49-51页
       ·供试酿酒葡萄品种第49页
       ·化学试剂第49页
       ·培养基配方第49-51页
     ·方法第51-52页
       ·植物材料消毒第51页
       ·离体叶片、叶柄再生体系的建立.............................................................第51页
       ·离体胚珠(Ovule)再生体系的建立.......................................................第51页
       ·离体花药、花丝再生体系的建立.............................................................第51页
       ·繁殖体系的建立.........................................................................................第51-52页
   ·结果与分析第52-68页
     ·离体叶片、叶柄再生体系的建立..................................................................第52-56页
       ·TDZ 对赤霞珠叶片愈伤组织诱导及不定芽再生的影响第52-54页
       ·TDZ、NAA 对黑比诺叶片愈伤组织诱导及不定芽再生的影响第54-55页
       ·TDZ 对霞多丽叶片愈伤组织诱导及不定芽再生的影响第55-56页
     ·离体离体胚珠再生体系的建立第56-60页
       ·葡萄胚珠愈伤组织的诱导第56-58页
       ·BA 和 2,4-D 对葡萄胚珠体细胞胚的诱导的影响..................................第58-59页
       ·NOA 对葡萄胚珠体细胞胚的诱导的影响第59-60页
     ·离体花药、花丝再生体系的建立第60-62页
       ·BA 和 2,4-D 对葡萄花药、花丝愈伤组织诱导的影响第60页
       ·NOA 对葡萄花药、花丝愈伤组织诱导的影响第60页
       ·BA 和 2,4-D 对 JT 花药、子房不同组织愈伤组织的诱导的影响第60-62页
     ·酿酒葡萄微繁体系的建立第62-68页
       ·酿酒葡萄腋芽增殖第62-64页
       ·葡萄增殖腋芽及离体叶片再生芽生根第64-65页
       ·梅尔诺葡萄胚珠体细胞胚诱导再生植株第65-68页
   ·讨论第68-70页
     ·基因型对葡萄再生体系建立的影响第68-69页
     ·植物生长调节剂(PGRs)对葡萄再生体系建立的影响第69-70页
     ·关于酿酒葡萄微繁体系的建立第70页
   ·绪论第70-71页
第三章 酿酒葡萄转基因体系的建立第71-88页
   ·材料与方法第71-74页
     ·材料第71页
       ·菌株和质粒载体第71页
       ·酶及主要生化试剂第71页
       ·供试植物材料第71页
     ·方法第71-74页
       ·35S-Egfp/pBI221 基因的鉴定第71-72页
       ·葡萄外植体对卡那霉素 (Kan.)的耐性试验第72页
       ·转基因方法第72-73页
       ·转基因葡萄的鉴定第73-74页
   ·结果与分析第74-83页
     ·农杆菌介导转基因体系的建立第74-78页
       ·葡萄胚性愈伤组织对 Kan.的耐性试验第74-75页
       ·农杆菌介导转基因植株的获得第75-76页
       ·转基因葡萄的 PCR 检测第76-77页
       ·转基因葡萄的 Southern blot 检测第77-78页
     ·基因枪介导葡萄转基因体系的建立第78-83页
       ·35S-Egfp/pBI221 的鉴定第78-81页
       ·转基因葡萄胚性愈伤组织的 GFP2 荧光检测第81-83页
   ·讨论第83-88页
     ·对转化细胞的有效筛选和检测第83-84页
       ·葡萄胚性愈伤组织对 Kan.的耐性试验第83页
       ·报告基因 Egfp 的应用第83-84页
     ·农杆菌介导转基因体系的建立第84-86页
     ·基因枪介导转基因体系的建立第86-88页
       ·压力的选择及其对基因枪介导转基因效率的影响第86页
       ·真空度的选择及其对基因枪介导转基因效率的影响第86页
       ·基因枪介导转基因体系的建立流程图第86-88页
第四章 抗病基因双价表达载体的构建第88-99页
   ·材料与方法第88-91页
     ·材料第88页
       ·菌株和质粒载体第88页
       ·酶及主要生化试剂第88页
     ·方法第88-91页
       ·农杆菌质粒的提取第88页
       ·PCR 引物设计及 PCR 扩增第88-89页
       ·PCR 产物回收及 T-载体克隆第89页
       ·T-载体克隆的鉴定筛选及序列测定第89页
       ·Glu./pBI121、Chi./pBI121 和 Rs-AFP2/pBI121 植物表达载体构建第89-90页
       ·Glu./pCAMBIA1300 和 Rs-AFP2/ pCAMBIA1300 植物表达载体构建第90页
       ·Glu.-Chi./pCAMBIA1300、Rs-AFP2-Chi./pCAMBIA1300 表达载体构建第90页
       ·Glu.-Chi./pCAMBIA1300、Rs-AFP2-Chi./pCAMBIA1300 转化农杆菌第90页
       ·转化农杆菌 EHA105 的 PCR 鉴定第90页
       ·转化农杆菌 EHA105 的 DNA dot blotting 鉴定第90-91页
   ·结果与分析第91-97页
     ·Glu.、Chi.和 Rs-AFP2 的克隆及单价植物表达载体的构建第91-93页
       ·PCR 扩增、T-Vector 克隆和测序第91页
       ·Glu./pBI121、Chi./pBI121 和 Rs-AFP2/pBI121 植物表达载体构建第91-93页
       ·Glu./pCAMBIA1300 和 Rs-AFP2/ pCAMBIA1300 植物表达载体构建第93页
     ·Glu.-Chi./pCAMBIA1300、Rs-AFP2-Chi./pCAMBIA1300 双价载体构建第93-97页
       ·Glu.-Chi./pCAMBIA1300、Rs-AFP2-Chi./pCAMBIA1300 的构建第93-95页
       ·pCGC、pCRC 转化农杆菌 EHA105(Rif.r/Str.r)及鉴定第95-96页
       ·转化农杆菌的 DNA dot blotting 鉴定第96-97页
   ·讨论第97-99页
     ·关于载体构建抗生素标记基因的选择问题第97页
     ·构建抗真菌蛋白基因的双价载体的意义第97-99页
第五章 结论第99-100页
参考文献第100-112页
作者简介第112页

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