| 中文摘要 | 第1-17页 |
| 英文摘要 | 第17-20页 |
| 第一章文献综述 | 第20-68页 |
| 1 植物低温胁迫响应的分子机理研究进展 | 第20-37页 |
| ·植物低温胁迫信号传导 | 第20-23页 |
| ·Ca2+与低温胁迫信号传导 | 第20-21页 |
| ·ABA 与植物低温信号传导 | 第21页 |
| ·蛋白激酶途径在低温信号传导中的作用 | 第21-22页 |
| ·次级信号的传导作用 | 第22-23页 |
| ·植物对于低温胁迫响应的调控 | 第23-32页 |
| ·转录调控 | 第23-28页 |
| ·ICE1-CBF 转录级联 | 第23-24页 |
| ·CBF 调节子的负调节子 | 第24-27页 |
| ·非CBFs 调节子 | 第27-28页 |
| ·转录后调控 | 第28-31页 |
| ·RNA 的加工和出核运输 | 第28-30页 |
| ·small RNAs 在植物低温响应中发挥重要作用 | 第30-31页 |
| ·翻译后调控 | 第31-32页 |
| ·直接参与植物低温胁迫响应的功能蛋白 | 第32-36页 |
| ·抗冻蛋白 | 第32-33页 |
| ·抗渗透胁迫相关蛋白 | 第33页 |
| ·抗膜脂相改变的蛋白 | 第33-34页 |
| ·植物脱水素 | 第34-35页 |
| ·热激蛋白 | 第35-36页 |
| ·抗氧化酶系统 | 第36页 |
| ·展望 | 第36-37页 |
| 2 植物非生物胁迫差异蛋白质组学研究进展 | 第37-53页 |
| ·差异蛋白质组学的研究方法 | 第38-41页 |
| ·双向电泳 | 第38页 |
| ·表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI)技术 | 第38-39页 |
| ·多维色谱分离技术 | 第39页 |
| ·SELDI 蛋白质芯片技术 | 第39-40页 |
| ·同位素亲和标签质谱技术 | 第40页 |
| ·生物信息学分析 | 第40-41页 |
| ·植物非生物胁迫差异蛋白质组学研究进展 | 第41-52页 |
| ·干旱胁迫 | 第41-43页 |
| ·盐渍胁迫 | 第43-46页 |
| ·低温胁迫 | 第46-47页 |
| ·机械损伤 | 第47-48页 |
| ·营养胁迫 | 第48页 |
| ·其他非生物胁迫 | 第48-52页 |
| ·缺氧胁迫 | 第48-49页 |
| ·光照胁迫 | 第49页 |
| ·植物胁迫信号物质处理 | 第49-50页 |
| ·环境污染 | 第50-51页 |
| ·除草剂胁迫 | 第51-52页 |
| ·植物差异蛋白质组学面临的主要问题和展望 | 第52-53页 |
| 3 胚胎发育后期丰富蛋白（LEA）的研究进展 | 第53-67页 |
| ·LEA 蛋白的特点 | 第53-61页 |
| ·基元序列和肽谱 | 第53-55页 |
| ·LEA 蛋白的系统发育 | 第55-56页 |
| ·LEA 蛋白的表达模式 | 第56-58页 |
| ·LEA 蛋白的亚细胞定位 | 第58页 |
| ·LEA 蛋白的结构 | 第58-60页 |
| ·LEA 蛋白生化特性 | 第60-61页 |
| ·LEA 蛋白的功能 | 第61-66页 |
| ·转基因研究 | 第61-63页 |
| ·稳定蛋白和分子屏障功能 | 第63-64页 |
| ·离子结合和抗氧化功能 | 第64-65页 |
| ·对膜的稳定作用 | 第65-66页 |
| ·其他潜在的功能 | 第66页 |
| ·展望 | 第66-67页 |
| 4 本研究的目的意义 | 第67-68页 |
| 第二章 棉花幼苗响应低温胁迫的差异蛋白质组学分析 | 第68-88页 |
| 1 材料与方法 | 第68-76页 |
| ·植物材料与试剂 | 第68-69页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·化学试剂 | 第68-69页 |
| ·方法 | 第69-76页 |
| ·棉花幼苗的培养与低温胁迫处理 | 第69页 |
| ·棉花幼苗子叶蛋白质的提取 | 第69页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第69-70页 |
| ·蛋白质的定量 | 第70页 |
| ·棉花子叶蛋白质的双向电泳 | 第70-73页 |
| ·第一向等电聚焦电泳 | 第70-71页 |
| ·IPG 胶条的平衡 | 第71页 |
| ·灌胶 | 第71-72页 |
| ·第二向SDS 电泳 | 第72页 |
| ·染色、脱色 | 第72-73页 |
| ·图象的扫描和分析 | 第73页 |
| ·差异点的胶内酶解 | 第73-74页 |
| ·MALDI-TOF-MS 质谱分析与数据检索 | 第74页 |
| ·子叶净光合速率的测定 | 第74-75页 |
| ·棉花幼苗子叶羧化效率的测定 | 第75页 |
| ·肽链内切酶活性的测定 | 第75页 |
| ·活性氧的测定 | 第75页 |
| ·丙二醛含量的测定 | 第75-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-84页 |
| ·棉花子叶蛋白质的双向电泳分析 | 第76页 |
| ·差异表达蛋白点的质谱鉴定 | 第76-82页 |
| ·低温胁迫对棉花子叶肽链内切酶活性的影响 | 第82页 |
| ·低温胁迫对棉花子叶净光合速率和羧化效率的影响 | 第82-83页 |
| ·低温胁迫对棉花子叶内活性氧产生速率及脂质过氧化的影响 | 第83-84页 |
| 3 讨论 | 第84-87页 |
| ·低温胁迫加速棉花幼苗储藏蛋白的降解 | 第84-86页 |
| ·低温胁迫加速棉花幼苗光合蛋白的降解 | 第86-87页 |
| 4 小结 | 第87-88页 |
| 第三章 烟草低温响应蛋白—胚胎后期丰富蛋白（NtLEA7-3）的研究 | 第88-135页 |
| 1 材料与方法 | 第89-109页 |
| ·材料 | 第89-90页 |
| ·植物材料 | 第89页 |
| ·载体和菌株 | 第89页 |
| ·试验引物 | 第89-90页 |
| ·其它材料 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-109页 |
| ·烟草悬浮细胞的培养 | 第90页 |
| ·烟草悬浮细胞的低温处理及其生长状况的测定 | 第90-91页 |
| ·烟草悬浮细胞蛋白质的双向电泳分析 | 第91-92页 |
| ·烟草悬浮细胞蛋白质的提取 | 第91页 |
| ·烟草悬浮细胞蛋白质的纯化 | 第91页 |
| ·烟草悬浮细胞蛋白质的定量 | 第91-92页 |
| ·烟草悬浮细胞蛋白质的双向电泳 | 第92页 |
| ·图象的扫描和分析 | 第92页 |
| ·差异蛋白点的MALDI-TOF/ TOF -MS 质谱鉴定 | 第92-93页 |
| ·差异点的胶内酶解 | 第92页 |
| ·差异蛋白点的MALDI-TOF/ TOF -MS 质谱分析 | 第92页 |
| ·数据检索 | 第92-93页 |
| ·烟草悬浮细胞总 RNA 的提取和差异点蛋白基因的荧光定量 PCR | 第93-94页 |
| ·烟草悬浮细胞总RNA的提取 | 第93页 |
| ·cDNA 的合成 | 第93页 |
| ·差异表达蛋白点的荧光定量PCR | 第93-94页 |
| ·烟草悬浮细胞 NtLEA7-3 基因的克隆 | 第94-97页 |
| ·NtLEA7-3 的 3'RACE | 第94页 |
| ·cDNA 同聚物加尾反应 | 第94-95页 |
| ·NtLEA7-3 的 5'RACE | 第95页 |
| ·NtLEA7-3 cDNA 编码区全长序列的获得 | 第95-96页 |
| ·目的片段的回收 | 第96页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第96页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第96页 |
| ·大肠杆菌细胞的转化 | 第96-97页 |
| ·质粒 DNA 的提取(小量碱法) | 第97页 |
| ·阳性克隆质粒的鉴定 | 第97页 |
| ·序列测定 | 第97页 |
| ·NtLEA7-3 序列分析 | 第97页 |
| ·NtLEA7-3 所编码的蛋白质特性分析 | 第97-98页 |
| ·NtLEA7-3基因表达载体的构建与鉴定 | 第98-101页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第98页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第98页 |
| ·NtLEA7-3 融合蛋白诱导表达、纯化与电泳分析 | 第98-99页 |
| ·NtLEA7-3 植物表达载体的构建与鉴定 | 第99-101页 |
| ·NtLEA7-3-GFP 融合基因植物表达载体的构建与鉴定 | 第101页 |
| ·农杆菌GV3101 感受态细胞制备及转化 | 第101-102页 |
| ·NtLEA7-3 及NtLEA7-3-GFP 基因转化烟草悬浮细胞及阳性转化系的PCR 鉴定 | 第102-103页 |
| ·烟草悬浮细胞的转化 | 第102页 |
| ·转基因烟草悬浮细胞的PCR 鉴定 | 第102-103页 |
| ·NtLEA7-3 基因在烟草中超表达及转基因烟草的PCR 鉴定 | 第103-104页 |
| ·烟草的转化方法 | 第103页 |
| ·转基因烟草的PCR 鉴定 | 第103-104页 |
| ·NtLEA7-3-GFP 融合基因在拟南芥中超表达及转基因拟南芥的PCR 鉴定 | 第104页 |
| ·拟南芥的无土栽培 | 第104页 |
| ·拟南芥转化方法 | 第104页 |
| ·转基因拟南芥的PCR 鉴定 | 第104页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第104-107页 |
| ·总RNA 的提取 | 第104页 |
| ·甲醛变性凝胶电泳 | 第104-105页 |
| ·转膜 | 第105-106页 |
| ·预杂交 | 第106页 |
| ·探针的制备 | 第106页 |
| ·杂交 | 第106-107页 |
| ·洗膜及放射自显影 | 第107页 |
| ·Western 杂交分析 | 第107-108页 |
| ·抗体的制备 | 第107页 |
| ·抗血清效价的测定（试管微量沉淀法） | 第107页 |
| ·Western 杂交 | 第107-108页 |
| ·NtLEA7-3 蛋白的亚细胞定位 | 第108页 |
| ·转NtLEA7-3 基因的烟草及悬浮细胞的抗冷性能分析 | 第108-109页 |
| ·转基因烟草及悬浮细胞的低温胁迫 | 第108页 |
| ·离子渗漏率(EL)的测定 | 第108-109页 |
| ·净光合速率、丙二醛含量、烟草悬浮细胞低温胁迫下生长状况的测定 | 第109页 |
| 2 结果与分析 | 第109-132页 |
| ·低温对烟草悬浮细胞生长的影响 | 第109-110页 |
| ·烟草悬浮细胞的蛋白质组双向电泳图谱 | 第110-112页 |
| ·差异表达蛋白点的质谱鉴定 | 第112-114页 |
| ·差异表达蛋白的荧光定量PCR 分析 | 第114-115页 |
| ·NtLEA7-3 的体外扩增与克隆 | 第115页 |
| ·NtLEA7-3 的序列分析 | 第115-118页 |
| ·NtLEA7-3 所编码的蛋白质特性分析 | 第118-122页 |
| ·NtLEA7-3 所编码的蛋白质结构分析 | 第118-119页 |
| ·疏水性分析 | 第119页 |
| ·跨膜区分析 | 第119-121页 |
| ·NtLEA7-3 蛋白质结构功能保守区和功能结构域分析 | 第121-122页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第122-123页 |
| ·pET30a-LEA 融合蛋白的诱导和抗体制备 | 第123-124页 |
| ·NtLEA7-3 及NtLEA7-3-GFP 融合基因植物表达载体的构建 | 第124-125页 |
| ·烟草NtLEA7-3 蛋白的亚细胞定位 | 第125-126页 |
| ·转基因烟草悬浮细胞及拟南芥的PCR 鉴定 | 第125页 |
| ·NtLEA7-3 蛋白的亚细胞定位分析 | 第125-126页 |
| ·烟草NtLEA7-3 基因的功能分析 | 第126-132页 |
| ·转基因烟草及烟草悬浮细胞的PCR 鉴定 | 第126-127页 |
| ·转基因株系的Northern 杂交 | 第127页 |
| ·转基因株系的Western 杂交 | 第127-128页 |
| ·转NtLEA7-3 基因烟草的抗低温胁迫性能分析 | 第128页 |
| ·转NtLEA7-3 基因烟草悬浮细胞的抗低温胁迫性能分析 | 第128-132页 |
| 3 讨论 | 第132-134页 |
| ·关于NtLEA7-3 的归属 | 第132页 |
| ·关于NtLEA7-3蛋白的结构 | 第132-133页 |
| ·关于NtLEA7-3 蛋白的亚细胞定位和功能 | 第133-134页 |
| 4 小结 | 第134-135页 |
| 第四章 转CBF1A 基因烟草悬浮细胞的差异蛋白质组学分析 | 第135-147页 |
| 1 材料与方法 | 第135-137页 |
| ·材料 | 第135-136页 |
| ·方法 | 第136-137页 |
| ·烟草悬浮细胞的培养 | 第136页 |
| ·CBF1A 植物表达载体的构建 | 第136页 |
| ·农杆菌LBA4404 感受态细胞制备及转化 | 第136页 |
| ·CBF1A 基因在烟草悬浮细胞中超表达及转基因细胞的筛选与PCR 鉴定 | 第136页 |
| ·转CBF1A 基因烟草悬浮细胞的Northern 杂交分析 | 第136页 |
| ·烟草悬浮细胞蛋白质的提取 | 第136-137页 |
| ·蛋白质的纯化、定量、双向电泳分析及质谱鉴定 | 第137页 |
| 2 结果与分析 | 第137-142页 |
| ·转CBF1A 基因烟草悬浮细胞的PCR 鉴定 | 第137页 |
| ·转CBF1A 基因烟草悬浮细胞的Northern 杂交分析 | 第137-138页 |
| ·转CBF1A 基因烟草悬浮细胞蛋白质的双向电泳分析 | 第138页 |
| ·差异表达蛋白点的质谱鉴定 | 第138-142页 |
| 3 讨论 | 第142-146页 |
| 4 小结 | 第146-147页 |
| 结论 | 第147-148页 |
| 参考文献 | 第148-175页 |
| 致谢 | 第175-176页 |
| 攻读学位期间发表的主要论文 | 第176页 |
